[发明专利]一种牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法

权利要求书

1.一种牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)配置消化液，包括配置模拟唾液SSF、模拟胃液SGF、模拟肠液SIF，利用GI20体外模拟消化系统进行模拟体外消化过程，包括ⅰ口腔、ⅱ胃和ⅲ小肠；

(b)测定不同分子量胶原蛋白多肽的消化特性，包括检测步骤(a)中ⅰ口腔、ⅱ胃和ⅲ小肠中的消化前后消化物的消化率。

2.根据权利要求1所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述步骤(a)中模拟体外消化ⅰ口腔的方法为：将胶原蛋白多肽加入SSF溶液，再加入唾液淀粉酶和溶菌酶，使用口腔模拟器模拟咀嚼，充分混合后放于GI-20体外胃肠模拟仪器中。

3.根据权利要求1所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述步骤(a)中模拟体外消化ⅱ胃的方法为：取模拟口腔中消化物，加入SGF溶液和胃蛋白酶，恒温孵育后置于沸水浴中灭酶处理。

4.根据权利要求1所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述步骤(a)中模拟体外消化ⅲ小肠的方法为：取胃消化物，添加SIF溶液和胰蛋白酶、胆汁盐，利用NaOH调节pH值，恒温孵育后置于沸水浴中灭酶处理。

5.根据权利要求1所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述步骤(b)中不同分子量胶原蛋白多肽，由以下方法制备得到：

(1)将新鲜牛骨粉碎、清洗，加入纯净水，通过高效热压抽提进行骨素的提取，静置后三相分离，去除骨油和中间混合层，经管式离心机后浓缩获得牛骨素；

(2)将EDTA溶液加入步骤(1)中的牛骨素，脱除牛骨素中钙离子，获得胶原蛋白多肽第一粗产品；

(3)将NaCl溶液加入步骤(2)中的胶原蛋白多肽第一粗产品，通过盐析法进一步提纯，低温离心分离，获得胶原蛋白多肽第二粗产品；

(4)将乙酸溶液加入步骤(3)中的胶原蛋白多肽第二粗产品进行溶解，而后进行分段透析，先用乙酸溶液透析、再用蒸馏水透析，获得胶原蛋白多肽第三粗产品；

(5)选择多梯度酶解对步骤(4)中的胶原蛋白多肽第三粗产品进行酶解，得到胶原蛋白多肽原液。

(6)将步骤(5)中的胶原蛋白多肽原液通过不同分子量半透膜反复透析提纯，获得不同分子量胶原蛋白多肽。

6.根据权利要求5所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述步骤(5)中多梯度酶解的方法包括：首先添加碱性蛋白酶，pH值9.0，酶解温度50℃，酶解2h，然后调节酶解液pH值8.0，再添加胰蛋白酶和复合风味蛋白酶，酶解温度40℃，酶解2h；最后90℃，20min灭酶处理。

7.根据权利要求1-6任一项所述的牛骨胶原蛋白多肽的消化特性评价方法，其特征在于，所述胶原蛋白多肽的多肽分子量分布为：

分子量范围	分子量占比
1kDa	25％～44％
1kDa-1.5kDa	15～40％
1.5kDa-2.5kDa	6％～10％
2.5kDa～3kDa	2％～5％
3kDa	0.5％～1％