[发明专利]免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液及制备和使用方法

说明书

本发明公开了免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液及制备和使用方法，涉及蛋白质分析检测技术领域。本发明包括如下配方：考马斯亮蓝G‑250、乙醇、硫酸铵、环糊精、盐酸调pH值至1.2‑1.4；制备方法包括如下步骤：S1、称取硫酸铵溶解于去离子水中；S2、加入环糊精；S3、称取考马斯亮蓝G‑250，溶于去离子水中；加入至S2步骤混合液中；S4、加入乙醇至混合液；S5、加入盐酸，调节pH值至1.2‑1.4；S6、定容至1L，室温避光保存。本发明极大地提高了考马斯亮蓝染色的检测灵敏度，在染色过程中，胶体状态的染料被排阻在胶外，很难对凝胶进行染色，防止了背景的生成；染色结束后无需洗脱，大大缩短了检测时间。

技术领域

本发明属于蛋白质分析检测技术领域，特别是免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液、免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液制备方以及免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液的使用方法。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳技术已成为分子生物学实验中最常用的蛋白质分析检测方法。蛋白质经过电泳分离后，在凝胶中可以通过几种染色方法检测，如考马斯蓝染色法(Coomassie Brilliant Blue CBB)、银染和荧光染色法等。

银染是最敏感的蛋白染色方法之一，可以检测纳克水平蛋白，但其缺点是操作难度大，重复率低。此外，与传统的考马斯蓝染色相比，银染色的质谱(MS)相容性更差，因为它在敏化溶液中含有戊二醛。它也被认为是一种与MS不相容的方法。

荧光染色也可以在纳克水平上检测蛋白质，无需特殊技术要求。目前，SYPROorange、SYPRO red、Deep Purple和Flamingo是蛋白质组学研究中常用的荧光染色剂。然而，荧光染色试剂价格昂贵，且需要相对较长的处理时间。它还需要特殊的设备，如荧光成像扫描仪。

尽管银染的灵敏度高，各种荧光检测方法的动态范围广，但考马斯亮蓝染色法仍是电泳分离蛋白最常用的检测技术。CBB染色在1963年首次用于在醋酸纤维素片上染色蛋白质。1965年Meyer等，将此方法用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。CBB染色具有以下优点:成本低，可直观观察，操作简单，便于图像采集扫描程序，比银染色更适合定量分析，可进行快速或高灵敏度染色。

经典的CBB染色法：需要先进行固定，再进行染色和脱色。固定液，染色液和脱色液成分复杂且含有对人体有害的甲醇、冰醋酸等。该方法的灵敏度不高，检测下限仅为200-500ng，背景较高，而且整个过程时间较长。U.S.application No.US2001046709报道不用甲醇、乙酸等有害物质，但是需要染色前将凝胶放入水中，微波炉加热漂洗，染色时也需要放入微波炉，操作繁琐。CN 109520804 B报道染色液中加入木寡糖，染色迅速；染色后不需要脱色液脱色，但任然需要用蒸馏水漂洗30分钟，至凝胶基本无背景。

本发明提供一种无甲醇、冰醋酸等对人体有害物质；无需固定，染色快，灵敏度高，且染色后不需脱色液脱色也不需蒸馏水漂洗即可直接观察拍照的蛋白染色液。节省操作时间。

发明内容

本发明提供了免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液及制备和使用方法，解决了以上问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明的免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液，包括如下配方：0.025％(W/V)的考马斯亮蓝G-250、10-20％(V/V)的乙醇、1-10％(W/V)的硫酸铵、0.5-5％(W/V)的环糊精、盐酸调pH值至1.2-1.4。

进一步地，所述环糊精采用α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精或其它改性环糊精中任意一种。

免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液的制备方法，以定容1L为基准，包括如下步骤：

S1、称取10-100g的所述浓度的硫酸铵，溶解于600ml去离子水中，搅拌溶解；