[发明专利]一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法有效
| 申请号： | 202110081475.8 | 申请日： | 2021-01-21 |
| 公开（公告）号： | CN112662615B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 朱灏 | 申请（专利权）人： | 华夏源细胞工程集团股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 上海微策知识产权代理事务所(普通合伙) 31333 | 代理人： | 张静 |
| 地址： | 201100 上海市闵行*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人间 干细胞 诱导 化成 染色 鉴定 方法 | ||
1.一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将染色用Adipo-Staining A和Adipo-StainingB混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；
(2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo-Fixation，静置；
(3)然后向步骤(2)中加入Adipo-Wash I清洗；
(4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；
(5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo-Wash II清洗；
(6)重复步骤(5)一次或多次；
(7)最后向步骤(6)中加入Adipo-Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成；
步骤(1)所述的Adipo-Staining A和Adipo-StainingB的体积比为3.5：2；
所述的Adipo-StainingA和Adipo-Staining B要求混合后3小时内有效；
步骤(2)中氯化钠注射液的质量浓度为0.7～1.0％；步骤(2)中吸掉清洗后的氯化钠注射液后再加入Adipo-Fixation；
步骤(2)中静置时间为20～30分钟；
步骤(4)中静置时间为25～30分钟；
步骤(5)中加入Adipo-Wash II清洗，清洗时间为3～5分钟；
步骤(6)中重复步骤(5)一次到三次；
所述的分化成脂后的间充质干细胞选择由血清代替物和间充质干细胞基础培养基培养得到的细胞；
所述Adipo-Fixation，货号C37A10020；Adipo-WashI，货号C37A20050；
Adipo-StainingA，货号C37A30020；Adipo-Staining B，货号C37A40010；
Adipo-WashII，货号C37A50050；Adipo-Inspection，货号C37A60010，以上试剂购于BI中国市场部上海逍鹏生物科技有限公司。
2.一种根据权利要求1所述的人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法的应用，其特征在于，用于脐带、脂肪、胎盘、羊膜的间充质干细胞诱导分化成脂后染色鉴定。
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