[发明专利]一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法

说明书

本发明属于生物技术领域，更具体的涉及一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法。本发明提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，包括以下步骤：(1)将染色用Adipo‑Staining A和Adipo‑Staining B混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；(2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo‑Fixation，静置；(3)然后向步骤(2)中加入Adipo‑Wash I清洗；(4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；(5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo‑Wash II清洗；(6)重复步骤(5)一次或多次；(7)最后向步骤(6)中加入Adipo‑Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成。此方法避免了染色后在显微镜中出现的块状漂浮物对细胞形态的判断。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体的涉及一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法。

背景技术

脂肪间充质干细胞Adipose-derived stem cells(ADSC)，是从脂肪组织中分离出来的一种多向分化干细胞，因其与BMSC形态形似而称为脂肪间充质干细胞。2001年，ZuK首次从人抽脂术抽取获得。人脂肪间充质干细胞具有许多特性，包括间充质干细胞潜在的增殖能力和适当条件下的多向分化能力。人脂肪充质干细胞不仅可以应用于组织的修复，而且在细胞免疫调节和基因治疗中均发挥重要作用。

因此，出现了较多有关研究人脂肪间充质干细胞分化的研究，也带动着研究者们对人间充质干细胞诱导分化成脂后的鉴定方法的开发。现阶段关于间充质干细胞诱导分化成脂后的染色过程可能存在因为染色剂的存在导致在观察细胞西南柜台的时候出现漂浮的块状物，影响对细胞形态的判断，影响研究者后续研发的进行。因此，开发一种快速、方便、准确的染色鉴定方法成为一项重要的研究。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的第一方面提供了一种人间充质干细胞诱导分化成脂的染色鉴定方法，包括以下步骤：

(1)将染色用Adipo-Staining A和Adipo-Staining B混合，得到染色工作液，记为Staining Solution，备用；

(2)将分化成脂后的间充质干细胞使用氯化钠注射液清洗，然后加入Adipo-Fixation，静置；

(3)然后向步骤(2)中加入Adipo-Wash I清洗；

(4)然后向步骤(3)中加入Staining Solution，静置染色；

(5)染色后再向步骤(4)中加入Adipo-Wash II清洗；

(6)重复步骤(5)一次或多次；

(7)最后向步骤(6)中加入Adipo-Inspection，置于显微镜下观察，拍照，完成。

作为一种优选的技术方案，步骤(1)所述的Adipo-Staining A和Adipo-StainingB的体积比为(1-4)：2。

作为一种优选的技术方案，所述的Adipo-Staining A和Adipo-Staining B要求混合后3小时内有效。

作为一种优选的技术方案，步骤(2)中氯化钠注射液的质量浓度为0.7～1.0％；步骤(2)中吸掉清洗后的氯化钠注射液后再加入Adipo-Fixation。

作为一种优选的技术方案，步骤(2)中静置时间为20分钟以上。

作为一种优选的技术方案，步骤(2)中静置时间为20～30分钟。

作为一种优选的技术方案，步骤(4)中静置时间为25～30分钟。