[发明专利]利用超高分辨成像技术实时追踪活体植物细胞核内蛋白运动的方法在审

专利信息
申请号: 202110082155.4 申请日: 2021-01-21
公开(公告)号: CN112760340A 公开(公告)日: 2021-05-07
发明(设计)人: 崔亚宁;钱虹萍 申请(专利权)人: 北京林业大学
主分类号: C12N15/84 分类号: C12N15/84;C12N15/65;A01H5/00;A01H6/20;G01N21/64
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 黄爽
地址: 100083 北京市*** 国省代码: 北京;11
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 利用 超高 分辨 成像 技术 实时 追踪 活体 植物 细胞核 蛋白 运动 方法
【权利要求书】:

1.利用超高分辨成像技术实时追踪活体植物细胞核内蛋白运动的方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)转基因植物材料的获得:利用基因工程手段,将目的基因和荧光报告基因进行融合表达,构建到植物基因组上,筛选得到转基因植株;

2)超分辨成像观察:用超分辨激光共聚焦显微镜对所得的转基因植株样品进行成像观察;

3)拍摄时间序列图像:利用超分辨激光共聚焦显微镜拍摄时间序列图像,捕获和追踪活细胞核内蛋白的动态,以获得高时空的单分子运动信息;

4)图像处理和分析运动参数信息:根据超分辨激光共聚焦显微镜所成像的时间序列图像信息,使用软件对采集的多张序列图像进行分析和处理,并绘制荧光蛋白在植物细胞核内的运动轨迹,并进一步计算出目标蛋白的荧光强度随时间的变化规律,进而得到荧光强度动态分布的动力学参数信息;

其中,所述植物为拟南芥。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤1)包括:通过同源重组方法将目的基因和带有荧光报告基因GFP的真核表达载体进行连接,其中目的基因位于荧光报告基因ATG起始密码子的上游;所得重组表达载体通过农杆菌介导法转化拟南芥,筛选得到转基因植株。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述目的基因为拟南芥MED18基因,所述真核表达载体为pCAMBIA2300-35S-GFP。

4.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,步骤2)中所述样品为转基因拟南芥的根部样品,优选根尖。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤2)中用ZeissLSM880Airyscan超分辨激光共聚焦显微镜的Airyscan模式进行成像,物镜使用100倍油镜,选取激发波长为488nm,收集波长为500~560nm,对样品进行超分辨成像,并根据拟南芥的样品状态和荧光亮度,来调整激光强度和EMGain电子增益倍数,使成像效果达到最佳。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,步骤3)中利用超分辨激光共聚焦显微镜拍摄的时间序列图像,Frame Size设置为512×512,拍摄速度设置为Max 9倍速,以632ms的时间间隔获取图像。

7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,步骤4)中根据超分辨激光共聚焦显微镜所成像的时间序列图像信息,使用Image J软件对采集的多张序列图像进行分析和处理,利用Imaris软件对目标蛋白的运动进行追踪和分析,数据拟合在OriginPro8软件中完成。

8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,步骤4)中将大于3帧的荧光点用于细胞核内荧光蛋白的分析。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于北京林业大学,未经北京林业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110082155.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code back_top