[发明专利]一种微小脲原体的微滴数字PCR检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种微滴式数字PCR绝对定量检测微小脲原体方法，其特征在于，其包括：

1)用于鉴定微小脲原体(Ureaplasma parvum，Up)的引物和探针，所述引物和探针包括正向引物Up-F、反向引物Up-R和探针序列Up-P，其特征在于所述正向引物Up-F的序列为：5’AGCTGTTTATATATGGAACGAACAA 3’(1782nt-1806nt)；

所述反向引物Up-R的序列为：5’TATCCAACTCGCTTAATTCAATT 3’(1863nt-1885nt)；所述探针序列Up-P的序列为：5’TATCAATTAGTTTTGGCTTCT 3’(1822nt-1842nt)。

2)制备微滴式数字PCR检测微小脲原体ddPCR反应液；

3)定量检测待测样本中微小脲原体的含量。

2.根据权利要求1所述的绝对定量检测方法，其特征在于，在所述步骤2)，反应液每份20μl，每份反应液中含组分：ddPCR预混液10μl，引物Up-F、Up-R、GAPDH-F、GAPDH-R各900nM，探针Up-P，GAPDH-P各250nM。

3.根据权利要求1所述的用于扩增微小脲原体的引物、探针，其特征在于，所述探针序列Up-P的一个末端具有第一荧光报告基团，另一个末端具有第一荧光淬灭基团；所述探针序列GAPDH-P的一个末端具有第二荧光报告基团，另一个末端具有第二荧光淬灭基团。

4.根据权利要求1所述的用于扩增微小脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团选自FAM、HEX，JOE、ROX、VIC、Texas Red、CY3或CY5；所述第一荧光荧光淬灭基团和第二荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2、MGB或NFQ。

5.根据权利要求1所述的用于扩增微小脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团置于探针序列Up-P的5’端，所述第一荧光淬灭基团置于探针序列Up-P的3’端；所述第二荧光报告基团置于探针序列GAPDH-P的5’端，所述第二荧光淬灭基团置于探针序列GAPDH-P的3’端。

6.根据权利要求1所述的用于扩增微小脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团是不同的；优选的，第一荧光报告基团为FAM，第二荧光报告基团为VIC。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，根据所述试剂盒的如下结果判断待测样本：当第一荧光报告基团和第二荧光报告基团均为阳性时，待测样本为微小脲原体阳性；当第一荧光报告基团为阴性，第二荧光报告基团为阳性时，待测样本为微小脲原体阴性。