[发明专利]一种解脲脲原体的微滴数字PCR检测方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种解脲脲原体的微滴式数字PCR检测方法，其特征在于，其包括：

1)用于鉴定解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum，Uu)的引物和探针，所述引物和探针包括正向引物Uu-F、反向引物Uu-R和探针序列Uu-P，其特征在于

所述正向引物Uu-F的序列为：5’ATTATCAAAACGTGCAATGA 3’(2187nt-2206m)；

所述反向引物Uu-R的序列为：5’ACCAACTAAAAATGCTGCTAAA 3’(2250nt-2271nt)；

所述探针序列Uu-P的序列为：5’ACCATCACCACTTTATT 3’(2208nt-2224nt)。

2)制备解脲脲原体微滴式数字ddPCR反应液：

3)定量检测待测样本中解脲脲原体的含量。

2.根据权利要求1所述的绝对定量检测方法，其特征在于，所述的步骤3)中，反应液每份20μl，每份反应液中含组分：ddPCR预混液10μl，引物Uu-F、Uu-R、GAPDH-F、GAPDH-R各900nM，探针Uu-P，GAPDH-P各250nM。

3.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述探针序列Uu-P的一个末端具有第一荧光报告基团，另一个末端具有第一荧光淬灭基团；所述探针序列GAPDH-P的一个末端具有第二荧光报告基团，另一个末端具有第二荧光淬灭基团。

4.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团选自FAM、HEX，JOE、ROX、VIC、Texas Red、CY3或CY5；所述第一荧光荧光淬灭基团和第二荧光淬灭基团选自TAMRA、BHQ1、BHQ2、MGB或NFQ。

5.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团置于探针序列Uu-P的5’端，所述第一荧光淬灭基团置于探针序列Uu-P的3’端；所述第二荧光报告基团置于探针序列GAPDH-P的5’端，所述第二荧光淬灭基团置于探针序列GAPDH-P的3’端。

6.根据权利要求1所述的用于扩增解脲脲原体的引物、探针，其特征在于，所述第一荧光报告基团和第二荧光报告基团是不同的；优选的，第一荧光报告基团为FAM，第二荧光报告基团为VIC。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，根据所述试剂盒的如下反应结果判断待测样本的结果：

当第一荧光报告基团和第二荧光报告基团均为阳性时，待测样本为解脲脲原体阳性；

当第一荧光报告基团为阴性，第二荧光报告基团为阳性时，待测样本为解脲脲原体阴性；

当第一荧光报告基团和第二荧光报告基团均为阴性时，待测样本采样不合格或DNA提取失败。