[发明专利]偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠及其制备方法与应用有效

专利信息
申请号: 202110085208.8 申请日: 2021-01-22
公开(公告)号: CN112415189B 公开(公告)日: 2021-03-30
发明(设计)人: 张晓慧;姜毅楠;苗景赟 申请(专利权)人: 北京百普赛斯生物科技股份有限公司
主分类号: G01N33/531 分类号: G01N33/531;G01N33/543;G01N33/68;C12N15/10
代理公司: 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 代理人: 黄爽
地址: 100176 北京市大兴*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 新型 冠状病毒 s2 蛋白 及其 制备 方法 应用
【说明书】:

发明提供偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠及其制备方法与应用。所述偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠是将表面修饰有链霉亲和素的磁珠与生物素标记的新型冠状病毒S2蛋白结合制得的。本发明还提供偶联后磁珠的冻干过程,以及偶联后磁珠的酵母展示scFv文库的筛选。该磁珠具有结合能力强,特异性好,稳定性高,便于操作的特点,既可用于新冠病毒S2抗体的富集,也可用于表达S2抗体的酵母细胞的淘选。利用本发明磁珠进行S2蛋白抗体的富集和表达S2蛋白抗体的细胞筛选,可将低浓度的特异性抗体捕获后进行浓缩,提高了灵敏度。在酵母展示scFv文库细胞筛选上,比流式细胞分选方法所需周期短,可快速筛出目标克隆酵母细胞,提高筛选效率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域,具体地说,涉及偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠及其制备方法与应用。

背景技术

新型冠状病毒SARS-CoV-2可导致人类病毒性肺炎或肺部感染,与2002年的SARS冠状病毒和2012年的MERS冠状病毒同属于β冠状病毒属。新型冠状病毒由膜表面的四种糖蛋白(棘突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核蛋白)以及RNA核酸链组成,其中棘突蛋白(SpikeGlycoprotein)担负新冠病毒与宿主细胞膜受体结合及膜融合功能,通过结合人的血管紧张素转换酶2(ACE2),从而介导病毒膜和细胞膜的融合,感染人的呼吸道上皮细胞,与病毒的传染能力相关,是新冠病毒最重要的表面膜蛋白。棘突蛋白含有S1与S2两个亚基,S1主要包含有受体结合区(Receptor binding domain,RBD),负责识别细胞的受体,S2则含有膜融合过程所需的基本元件,促进病毒细胞融合。

开发新的抗新型冠状病毒S2蛋白抗体并构建快速高效的抗体筛选技术,将为新型冠状病毒的诊断和治疗提供有力工具。

发明内容

本发明的目的是提供偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠及其制备方法与应用。

为了实现本发明目的,第一方面,本发明提供一种偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠,所述偶联新型冠状病毒S2蛋白的磁珠是将表面修饰有链霉亲和素(SA)的磁珠与生物素(Biotin)标记的新型冠状病毒S2蛋白(生物素化的S2蛋白)结合制得的

其中,新型冠状病毒S2蛋白包含如下的氨基酸序列或由其组成:

i)如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列;或

ii)在i)的N端和/或C端连接标签得到的氨基酸序列;或

iii)i)或ii)的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的蛋白。

蛋白偶联到磁珠的方式多种多样,可以通过羧基或氨基共价偶联的方式,直接将蛋白共价偶联到磁珠上,也可以通过标签抗体,将带有标签的蛋白偶联到磁珠上,在进行抗体捕获时,由于抗原蛋白的结合位点通常不止一个,因此用抗原去筛选出不同表位的抗体,需要抗原的结合表位能够全部暴露出来,通过羧基或氨基共价偶联到磁珠表面的抗原,都存在部分结合位点暴露不充分的可能性,而通过标签抗体偶联的抗原蛋白,则要求标签抗体和抗原蛋白间能很牢固结合在一起,也即需要高亲和力。由于SA和Biotin的解离常数在10-14M数量级,一旦结合往往是不可逆的强结合,因此链霉亲和素(SA)偶联的磁珠去结合生物素(Biotin)标记的抗原蛋白会更牢固,且抗原蛋白的结合位点也能更好地暴露出来。

优选地,磁珠的平均粒径大小为1-5μm左右,链霉亲和素共价偶联于磁珠表面,每mg磁珠偶联500-2000pmol链霉亲和素;所述表面修饰有链霉亲和素的磁珠可结合游离生物素的量为500-2000pmol/mg磁珠。

更优选地,磁珠的平均粒径大小为2μm左右,链霉亲和素共价偶联于磁珠表面,每mg磁珠偶联1000pmol链霉亲和素;所述表面修饰有链霉亲和素的磁珠可结合游离生物素的量为1000pmol/mg磁珠。

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