[发明专利]一种郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法

权利要求书

1.一种郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法，其特征在于，包括下述步骤：

1）病原菌活化：将保存的郁金香种球腐烂病病原菌转接到 PAD 平板上，以不接病原菌的 PDA 平板为对照，25 ℃条件下培养 5-7 d，备用；

2）郁金香种球消毒：挑选健康、无病虫害的郁金香种球，去除外层膜质种球皮后，流水冲洗种球表面杂质；将郁金香种球最外层鳞片于基部剥离，于 1.5 % NaClO 溶液中消毒10 min，鳞片取出后无菌水冲洗 5 次，将消毒后的鳞片放在灭菌滤纸上吸干水分；

3）鳞片组织块刺伤接种：在步骤 2）消毒的郁金香鳞片上用灭菌刀片切取组织块，用无菌接种针穿刺组织块形成 3 个小孔，每 2 个孔之间的距离约为 5 mm；将步骤 1）已活化的郁金香种球腐烂病病原菌菌饼接种在刺伤的小孔上，以接种无菌的 PDA 培养基为空白对照；

4）保湿培养：将经步骤 3）处理的郁金香鳞片组织块放入铺有灭菌湿润滤纸的无菌培养皿中，保湿，置于 25 ℃条件下培养；

5）发病情况观察与记录：接种 3 d 后，观察并记录鳞片组织块发病情况。

2.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 1）中，所述 PDA 平板为新鲜配制的 PDA 培养基所倒平板。

3.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 2）中，所述郁金香种球为贮藏中期的种球。

4.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 3）中，所述无菌刀片切取鳞片组织块方向为竖向切取；所述组织块大小为 1.5~2×1~1.5 cm²。

5.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 3）中，所述无菌接种针穿刺组织块形成小孔具体位置在组织块的中心位置；所述小孔的深度以穿透鳞片为准。

6.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 3）中，所述病原菌菌饼直径为 8mm。

7.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 4）中，所述放入培养皿中的鳞片组织块刺伤接种部位正面朝上放置。

8.如权利要求 1 所述的方法，其特征在于，所述步骤 4）中，所述保湿需用镊子夹取 3层 2×1.5 cm² 的灭菌湿润纱布覆盖在鳞片组织块接种处。