[发明专利]一种郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法

说明书

本发明涉及一种郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法，包括如下步骤：选择贮藏中期、健康的郁金香种球，去除外层膜质种球皮，取最外层鳞片，采用流水冲洗、NaClO浸泡及无菌水冲洗等方式进行消毒，用无菌刀片竖向切取大小为1.5~2×1~1.5 cm²的鳞片组织块，接种针刺穿组织块中心位置形成3个小孔；将已活化的病原菌菌饼接种在小孔上，以接种PDA培养基为空白对照，将处理和对照材料放入无菌培养皿中，用灭菌湿润纱布盖在接种处，25℃保湿培养3 d后，观察并记录鳞片组织块发病情况。该技术应用于郁金香种球腐烂病抗性鉴定，方法简单、快速、对接种材料破坏性小。

技术领域

本发明属于植物病理领域，具体涉及一种快速鉴定郁金香种球腐烂病抗病性的方法。

背景技术

郁金香（Tulipa gesneriana L.），又名洋荷花、草麝香，属百合科郁金香属多年生鳞茎类球根花卉，是春季重要的花坛植物，常用于花卉展览、盆栽观赏和鲜切花种植。由尖孢镰刀菌郁金香专化型（Fusarium oxysporum f.sp. tulipae）引起的种球腐烂病，也称基腐病，是郁金香栽培中最主要的真菌病害之一，在种球贮藏期，发病症状主要表现为种球流胶、淀粉组织分解腐烂，种球难以发根，进而不能发芽；在植株生长期间，发病症状则主要表现为地上部分植株矮小、叶片紫红色至紫褐色、不开花，严重者植株枯萎，土壤内种球腐烂（肖津邹天鹰，2009）。种球腐烂病的发生不仅严重影响种球的质量和繁育，同时显著降低鲜切花的观赏性和产量。我国栽植的郁金香品种 80 %以上从荷兰进口（王锦，2005），由于受气候条件、品种适应性和栽培技术等方面因素的限制，郁金香种球腐烂病的发生更为普遍，严重影响郁金香的观赏价值和经济效益（常瑾等，2010）。

目前对郁金香基腐病进行抗性鉴定主要采取两种方法：一种方法是土壤感病接种法，即将病原菌加入栽培基质中进行预培养，待基质中的菌量达到要求后，将健康郁金香种球埋入基质中，通过肉眼观察，以健康种球的百分率为衡量抗性的标准进行鉴定（Van Eijket al. 1978; Van Eijk et al. 1979）。这种传统的肉眼评价方法能够大规模的筛选抗性植株，是目前郁金香种球腐烂病抗性鉴定应用最普遍的方法，但是该方法接种周期长，菌种培养以及接种后温室培养需要 10-12 周的时间，且接种效果不稳定，易受温度、湿度及其他病原微生物的影响；另一种方法是 GFP-tagged F. oxysporum 接种鉴定，即通过刺伤郁金香种球将携带绿色荧光蛋白基因（gfp）的尖孢镰刀菌菌株，通过 gfp 在病原体内表达合成绿色荧光蛋白 GFP，以 GFP 信号为标记监控病原菌的侵染过程（Tang et al. 2015）。该方法得到的表型数据精确，可以对感病程度进行定量分析，但是需要 gfp标记病原菌，操作复杂，且表型数据定量分析需要专业软件，对于常规实验室或小型花卉企业很难做到。以上两种鉴定方法，对接种的郁金香种球破坏性极大，均需要大量的郁金香种球。综上所述，开发一种接种周期短、受环境因素影响小、易操作、对接种对象破坏性小的郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法，对荷兰郁金香栽培品种在我国的种植推广和我国野生郁金香资源的保护利用，具有重要价值。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足，建立一种郁金香种球腐烂病抗性鉴定方法，缩短抗性鉴定周期，减轻对郁金香种质资源的破坏，为深入开展郁金香抗病育种研究提供试验依据。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：首先，对郁金香种球腐烂病菌进行活化培养，对郁金香剥离的最外层鳞片进行消毒并切取组织块，然后采用鳞片组织块刺伤接种法接种病原菌，25 ℃条件下培养 3 天，观察记录组织块发病情况，从而对不同抗病性的郁金香种质进行鉴定。

本发明所述郁金香种球腐烂病的抗性鉴定方法包括如下步骤：