[发明专利]用于鉴定谷斑皮蠹的LAMP引物组及其应用

权利要求书

1.用于鉴定或辅助鉴定谷斑皮蠹的成套引物组，由引物-F3、引物-B3、引物-FIP和引物-BIP组成；

所述引物-F3为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-B3为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-FIP为如下a5)或a6)：

a5)序列表中序列3所示的单链DNA分子；

a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物-BIP为如下a7)或a8)：

a7)序列表中序列4所示的单链DNA分子；

a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的单链DNA分子。

2.根据权利要求1所述的成套引物组，其特征在于：所述引物-F3、所述引物-B3、所述引物-FIP和所述引物-BIP的摩尔比为1:1:8:8。

3.权利要求1或2所述的成套引物组在如下b1)-b4)中任一种中的应用：

b1)鉴定或辅助鉴定谷斑皮蠹；

b2)鉴定或辅助鉴定待测皮蠹是否为谷斑皮蠹；

b3)检测或辅助检测待测样本是否含有谷斑皮蠹；

b4)区分或辅助区分谷斑皮蠹与其它皮蠹。

4.含有权利要求1或2所述成套引物组的试剂盒；

所述试剂盒的功能为如下c1)-c4)中任一种：

c1)鉴定或辅助鉴定谷斑皮蠹；

c2)鉴定或辅助鉴定待测皮蠹是否为谷斑皮蠹；

c3)检测或辅助检测待测样本是否含有谷斑皮蠹；

c4)区分或辅助区分谷斑皮蠹与其它皮蠹。

5.权利要求4所述试剂盒的制备方法，为如下d1)或d2)：

d1)将权利要求1或2所述的成套引物组中的各条引物分别单独包装；

d2)将权利要求1或2所述的成套引物组中的各条引物按比例混合在一起。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述d2)中，将所述成套引物组中的所述引物-F3、所述引物-B3、所述引物-FIP和所述引物-BIP按照摩尔比为1:1:8:8的比例混合在一起。

7.一种鉴定或辅助鉴定待测皮蠹是否为谷斑皮蠹的方法，为如下S1)或S2)或S3)：

所述S1)包括如下步骤：提取待测皮蠹的核酸，以待测皮蠹核酸为模板，采用权利要求1所述的成套引物组进行环介导等温扩增；环介导等温扩增反应结束后通过检测反应产物电泳后是否呈现梯状条带判断待测皮蠹是否为谷斑皮蠹：若反应产物电泳后呈现梯状条带，则待测皮蠹为或候选为谷斑皮蠹；若反应产物电泳后无梯状条带，则待测皮蠹不为或候选不为谷斑皮蠹；

所述S2)包括如下步骤：提取待测皮蠹的核酸，以待测皮蠹核酸为模板，采用权利要求1所述的成套引物组进行环介导等温扩增；完成环介导等温扩增后，通过观察反应体系颜色判断待测皮蠹是否为谷斑皮蠹：若反应体系呈黄色，则待测皮蠹为或候选为谷斑皮蠹；若反应体系呈粉红色，则待测皮蠹不为或候选不为谷斑皮蠹；

所述S3)包括如下步骤：提取待测皮蠹的核酸，以待测皮蠹核酸为模板，采用权利要求1所述的成套引物组进行环介导等温扩增；完成环介导等温扩增后，通过观察实时荧光PCR结果是否出现明显扩增峰判断待测皮蠹是否为谷斑皮蠹：若出现明显扩增峰，则待测皮蠹为或候选为谷斑皮蠹；若无明显扩增峰，则待测皮蠹不为或候选不为谷斑皮蠹。