[发明专利]一种沉默长非编码RNA表达的方法及其应用

权利要求书

1.用于在真核细胞基因组中沉默长非编码RNA表达的成对sgRNA，分别记作sgRNA-1和sgRNA-2；所述sgRNA-1靶向靶序列1，所述靶序列1为表达所述长链非编码RNA的基因组序列中任一内含子的BPS位点上游的序列；所述sgRNA-2靶向靶序列2，所述靶序列2为表达所述长链非编码RNA的基因组序列中同一内含子的3’SS位点下游的序列。

2.根据权利要求1所述的成对sgRNA，其特征在于：所述靶序列1为表达所述长链非编码RNA的基因组序列中任一内含子的BPS位点上游500-50bp的序列；所述靶序列2为表达所述长链非编码RNA的基因组序列中同一内含子的3’SS位点下游75-500bp的序列。

3.如下任一生物材料：

P1、能够转录得到权利要求1或2所述成对sgRNA的DNA分子；

P2、含有P1中所述DNA分子的表达构建体；

P3、含有P2中所述表达构建体的重组菌；

P4、含有P2中所述表达构建体的重组细胞。

4.用于在真核细胞基因组中沉默长非编码RNA表达的成套产品，为如下任一：

Q1、由i)特定核酸酶或表达构建体1，和ii)权利要求1或2中所述sgRNA-1或表达构建体2，和iii)权利要求1或2中所述sgRNA-2或表达构建体3组成；

Q2、由i)特定核酸酶或表达构建体1，和ii)表达构建体4组成；

Q3、由i)表达构建体5，和ii)所述sgRNA-2或表达构建体3组成；

Q4、由i)表达构建体6，和ii)所述sgRNA-1或表达构建体2组成；

Q5、表达构建体7；

所述表达构建体1为能够表达所述特定核酸酶的表达构建体；

所述表达构建体2为能够同时表达所述sgRNA-1的表达构建体；

所述表达构建体3为能够表达所述sgRNA-2的表达构建体；

所述表达构建体4为能够表达所述sgRNA-1和所述sgRNA-2的表达构建体；

所述表达构建体5为能够同时表达所述特定核酸酶和所述sgRNA-1的表达构建体；

所述表达构建体6为能够同时表达所述特定核酸酶和所述sgRNA-2的表达构建体；

所述表达构建体7为能够同时表达所述特定核酸酶和所述sgRNA-1和所述sgRNA-2的表达构建体；

所述特定核酸酶为能够识别并切割所述sgRNA-1和所述sgRNA-2的靶序列的任意核酸酶。

5.根据权利要求4所述的成套产品，其特征在于：所述特定核酸酶为CRISPR核酸酶；

进一步地，所述特定核酸酶为Cas9核酸酶。

6.权利要求1或2所述的成对sgRNA或权利要求3所述的生物材料或权利要求4或5所述的成套产品的用途，为用于在真核细胞基因组中沉默长非编码RNA的表达。

7.一种在真核细胞基因组中沉默长非编码RNA表达的方法，是通过将真核靶细胞基因组中表达目的长非编码RNA的序列中任一内含子的BPS位点和3’SS位点以及这两个位点之间的部分敲除或替换为其他序列，从而实现所述目的长非编码RNA的表达沉默。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：向所述真核靶细胞中导入权利要求4或5所述的成套产品。