[发明专利]一种肠道病毒EV71型病毒样颗粒、编码基因、表达载体、重组酵母菌及制备方法和应用

权利要求书

1.一种肠道病毒EV71型病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由EV71病毒的P1前体蛋白的四个结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4自组装获得，结构蛋白VP1的氨基酸序列如SEQID No.1所示；结构蛋白VP2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；结构蛋白VP3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；结构蛋白VP4的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。

2.权利要求1所述病毒样颗粒的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5～8所示；其中，结构蛋白VP1的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；结构蛋白VP2的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；结构蛋白VP3的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；结构蛋白VP4的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

3.包含权利要求2所述编码基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中的编码基因按照VP4-VP2-VP3-VP1的顺序串联表达。

4.根据权利要求3所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的骨架载体为汉逊酵母表达载体。

5.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌包括权利要求3或4所述的重组表达载体。

6.权利要求1所述病毒样颗粒、权利要求2所述编码基因、权利要求3或4所述表达载体或权利要求5所述重组菌在制备肠道病毒EV71型病毒疫苗中的应用。

7.一种肠道病毒EV71型病毒样颗粒疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)分别构建权利要求1所述四个结构蛋白VP4、VP2、VP3和VP1的表达盒元件；

(2)将VP4、VP2、VP3和VP1的表达盒元件依次串联到表达载体中，得到重组表达载体；

(3)将所述重组表达载体转化宿主细胞，筛选得到多拷贝转化子；

(4)利用多拷贝转化子表达得到肠道病毒EV71型病毒样颗粒疫苗。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述表达载体为汉逊酵母表达载体；步骤(3)所述宿主细胞为尿嘧啶缺陷型ATCC26012(Ura3-)；步骤(4)所述表达在体积浓度为0.5～1.5％的甲醇溶液诱导下进行。

9.权利要求7或8所述制备方法制备得到的肠道病毒EV71型病毒样颗粒疫苗。