[发明专利]一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液及其制备方法，属于生物制品技术领域。该修复液以体积百分比包括：成纤维细胞生长因子浓缩液48.5％‑49.95％，表皮细胞生长因子浓缩液48.5％‑49.95％；蜂胶0.05％‑1％；透明质酸0.05％‑2％。在本发明中，从皮肤组织中提取表皮层与真皮层，分别进行真皮成纤维细胞和表皮细胞培养，经过处理得到成纤维细胞生长因子浓缩样品和表皮细胞生长因子浓缩样品，将成纤维细胞生长因子浓缩样品和表皮细胞生长因子浓缩样品混合，并加入透明质酸和用酒精溶解后的蜂胶，得到该修复液，本发明制备的修复液能够提供两种不同层面的皮肤复合生长因子，对表皮和真皮层都有修复功能，且该修复液成分对皮肤无刺激、无副作用、易于吸收。

技术领域

本发明涉及生物制品技术领域，特别涉及一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液及其制备方法。

背景技术

皮肤是躯体的防水层，他保护躯体，防止躯体脱水，同还起着保护身体不受外物侵害，保持体内环境稳定性的作用。皮肤的颜色与光泽可以反映气血的盛衰，反映某些内在脏腑的健康状态，严重的皮肤创伤、损伤烧烫伤以及某些疾病引起的皮肤病会给患者带来身体和精神上的巨大影响。因此对皮肤创面的修复是医疗美容领域十分关注的问题。自上世纪末开始，各学科专家已对创伤后的组织修复过程、发生机制和治疗领域等进行了多方面研究，生物学的迅速发展以及各学科之间的互相影响，使创伤修复与组织再生等水平得到不断提升。

成纤维细胞生长因子(FGF)是一类来源于中胚层和神经外胚层的多种类型的具有广泛生物活性的细胞生长因子。目前，已发现多种生长因子，如表皮生长因子、转化生长因子、血小板衍生生长因子、趋化生长因子成纤维细胞生长因子等。已发现表皮生长因子(EGF)能有效促进和调节表皮细胞的生长和增值。可促进皮肤细胞的产生，同时增加其他内源性生长因子的含量，促进细胞分泌透明质酸和糖蛋白，合理调整皮肤结构，达到爽肤、内肤、预防色斑延缓衰老和减少皱纹的效果成纤维细胞生长。

现有技术中的修复液不能够对表皮和真皮层都有修复功能，因此，现在亟需一种能够对表皮和真皮层都有修复功能含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液及其制备方法。

发明内容

为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液及其制备方法。所述技术方案如下：

一方面，提供了一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液，所述修复液以体积百分比包括：成纤维细胞生长因子浓缩液48.5％-49.95％，表皮细胞生长因子浓缩液48.5％-49.95％；蜂胶0.05％-1％；透明质酸0.05％-2％。

另一方面，提供了一种含有人皮肤细胞复合生长因子的修复液的制备方法，所述方法包括：皮肤样本处理：在无菌条件下，取用户本人双眼皮皮肤组织置于保存液中，4℃保存；然后用无菌的组织镊取出所述双眼皮皮肤组织于无菌培养皿中，用生理盐水清洗至无血迹，然后用无菌剪刀剪成1×5mm的条形状；用dispaseII酶消化，用生理盐水稀释后，离心，弃掉dispaseII酶，用无菌的组织镊将表皮层与真皮层分开；

真皮成纤维细胞和表皮细胞培养：用剪刀分别将所述表皮层和所述真皮层分别剪碎至1×1×1mm大小的组织块；再用胶原酶II分别消化所述表皮层的组织块和所述真皮层的组织块；然后分别加入生理盐水稀释，离心，弃掉上清；将处理后的所述真皮层的组织块吹悬成纤维细胞，接种于T75培养瓶中；将处理后的所述表皮层的组织块吹悬表皮细胞接种于第一培养瓶中；

将所述T75培养瓶和所述第一培养瓶分别每2-3天换液一次，待所述成纤维细胞和所述表皮细胞融合度均达到90％时，分别用胰酶消化传代；待传至6代，所述成纤维细胞和所述表皮细胞融合度均达到90％时，均弃掉培养上清，将所述T75培养瓶更换为DMEM基础培养基，将所述第一培养瓶更换为EPlife基础培养基，分别培养三天，分别收集成纤维细胞培养上清和表皮细胞培养上清于两个无菌瓶中，再均用胰酶进行消化传代；然后离心，浓缩，调节pH，过滤除菌，分别得到成纤维细胞生长因子浓缩样品和表皮细胞生长因子浓缩样品；