[发明专利]一种全预混RT-PCR反应体系及其应用在审
| 申请号： | 202110088998.5 | 申请日： | 2021-01-22 |
| 公开（公告）号： | CN112831551A | 公开（公告）日： | 2021-05-25 |
| 发明（设计）人： | 郭海荣;王颖;郑和平;陈峰 | 申请（专利权）人： | 武汉明德生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 武汉智嘉联合知识产权代理事务所(普通合伙) 42231 | 代理人： | 易贤卫 |
| 地址： | 430074 湖北省武汉市东湖新技术开发区高*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 全预混 rt pcr 反应 体系 及其 应用 | ||
1.一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述反应体系包括：缓冲物质、阳离子、脱氧核糖核苷酸、DNA聚合酶、逆转录酶和PCR稳定剂；
所述PCR稳定剂包括：选自BSA、海藻糖、葡聚糖、DMSO、甲酰胺、PEG8000和甘油中的至少三种。
2.根据权利要求1所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述PCR稳定剂包括：选自0.1～1mg/mL BSA，0.1～0.3M海藻糖、1％～3％葡聚糖、1％～3％DMSO、2％～4％甲酰胺、1％～3％PEG8000和1％～5％甘油中的至少三种。
3.根据权利要求1所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述反应体系中还包括UNG酶和核糖核酸酶抑制剂。
4.根据权利要求1所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述缓冲物质为浓度为5～100mmol/L的Tris类缓冲物质和/或两性离子缓冲物质。
5.根据权利要求4所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述缓冲物质的浓度为10～60mmol/L。
6.根据权利要求4所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述Tris类缓冲物质选自Tris盐酸缓冲液和Tris硫酸缓冲液中的至少一种；所述两性离子缓冲物质选自Tricine缓冲液和Bicine缓冲液中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述阳离子包括单价阳离子和二价阳离子中的至少一种；其中所述单价阳离子选自浓度为10～130mmol/L的K+和/或NH4+；所述二价阳离子为浓度为1.5～6mmol/L Mg2+。
8.根据权利要求1所述的一种全预混RT-PCR反应体系，其特征在于，所述DNA聚合酶为2～5U的热启动Taq DNA聚合酶，所述逆转录酶为6-12U的M-MLV逆转录酶。
9.如权利要求1-8任一项所述的全预混RT-PCR反应体系在反转录PCR中的应用。
10.一种反转录PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括如权利要求1-8任一项所述的全预混RT-PCR反应体系。
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