[发明专利]一种快速准确检测血清中总胆固醇的方法

说明书

本发明公开了一种快速准确检测血清中总胆固醇的方法，步骤是1)基于检测胆固醇氧化酶(Chox)酶促反应产物H₂O₂的纳米多孔金(NPG)/丝网印刷(SPE)试纸条制备及表征；2)以试纸条校定基于检测Chox酶促反应产物H₂O₂对应的胆固醇浓度线性关系，做出胆固醇浓度线性标准曲线；3)以血清为实际样本，检测血清中总胆固醇含量。本发明方法不涉及颜色反应，可有效解决传统比色法中血清颜色影响检测结果及试剂颜色不稳定等问题，且由于酶的特异性识别反应，增强了检测的准确性，同时本发明方法不需要复杂的样品分离等其他前处理过程，且出峰电流响应迅速，耗时较短，能够实现胆固醇高效快速的检测，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及一种检测血清总胆固醇的方法，尤其涉及一种利用基于胆固醇氧化酶酶促反应的试纸条电化学方法检测血清中总胆固醇的方法。属于电化学分析测试领域。

背景技术

胆固醇是存在于脂肪中的一种蜡质类固醇，是人体的重要组成部分，分为游离胆固醇(大约占30％)和酯化胆固醇(大约占70％)两种形式，合称为总胆固醇。根据研究显示，血清中正常胆固醇浓度范围是120～260mg/dl。大约有75％的胆固醇是由人体产生，而其它25％的胆固醇是由食物摄取所产生。胆固醇是肝脏产生的一种必需脂质，在血管的强化和维持上担任重要的任务，同时是合成肾上腺皮质激素、性激素的重要原料。然而，血液中过高的胆固醇会显著增加动脉疾病的风险。大多数冠心病、高血压、动脉粥样硬化和脂代谢功能障碍的发生，都源于血清中高胆固醇，因此，测定血清总胆固醇的含量已经成为临床诊断中一个重要的参考指标。

目前，对血清胆固醇的检测多以酶法为基础，其中包括比色法，传统的比色测定胆固醇有很多缺点，包括变量酯的反应，不稳定的试剂颜色等。且这种方法易受多种干扰因素的影响，如血红蛋白、胆红素、抗坏血酸等会干扰测定结果。此外，荧光法，高效液相色谱法(HPLC)，高效液相色谱-电化学检测，气液色谱法，气相色谱分析-质谱法(GC-MS)也常用于胆固醇的检测，但这些方法需要复杂的样品前处理或成分分离，耗时较长且需要昂贵的仪器。基于这些原因，开发一些低成本、高效、精准且易于样品前处理的用于分析临床样本中总胆固醇的替代方法，具有重要现实意义和市场需求。

近年来，具有高灵敏度、操作简单、响应快速且适于实时分析等优点的电化学检测方法受到了研究者的广泛关注。已报道的有关基于胆固醇氧化酶(Chox)酶促反应检测血清中胆固醇的电化学方法常常涉及传感器的酶修饰等，但其应用及存储常常受到pH和温度等因素的影响。因此，制备简便、环境稳定性高的非酶传感器有望是解决上述缺点以实现血清中总胆固醇检测的有效手段。然而，检索发现目前尚未有关于利用基于检测胆固醇氧化酶酶促反应产物过氧化氢(H₂O₂)的非酶传感器的电化学检测方法以及利用基于胆固醇氧化酶酶促反应的试纸条电化学方法检测血清中总胆固醇方法的相关报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种利用基于胆固醇氧化酶酶促反应的试纸条电化学方法检测血清中总胆固醇的方法。

本发明所述的快速准确检测血清中总胆固醇的方法，步骤是：

(1)基于检测胆固醇氧化酶(Chox)酶促反应产物H₂O₂的纳米多孔金(NPG)/丝网印刷(SPE)试纸条制备及表征；

(2)以试纸条校定基于检测胆固醇氧化酶(Chox)酶促反应产物H₂O₂对应的胆固醇浓度线性关系，做出胆固醇浓度线性标准曲线；

(3)以血清为实际样本，检测血清中总胆固醇含量；

其特征在于：

步骤(1)所述基于检测胆固醇氧化酶(Chox)酶促反应产物H₂O₂的纳米多孔金(NPG)/丝网印刷(SPE)试纸条制备及表征的方法是：