[发明专利]一种豇豆原位转化方法有效
| 申请号： | 202110092522.9 | 申请日： | 2021-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN113151350B | 公开（公告）日： | 2023-03-24 |
| 发明（设计）人： | 叶志彪;丁蕾;王文乾;卢永恩;张余洋;张俊红;王涛涛;欧阳波;杨长宪;叶杰 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/54 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 刘璐 |
| 地址： | 430000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 豇豆 原位 转化 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种豇豆原位转化方法，其特征在于，包括以下步骤：
对豇豆种子催芽至子叶节完全露出，获得转化受体；
制备含有表达载体和目的基因的农杆菌的浸染液；所述农杆菌为C58、表达载体为pCAMBIA1300，目标基因为Cry1C；
在负压条件下，将所述转化受体浸泡在所述浸染液中进行浸染；所述浸染液OD600值为0.6-0.8，负压压强为0.07MPa-0.08MPa，浸染时间为120s；
将浸染后的转化受体移入土壤进行培育，两周后筛选幼苗中的阳性植株。
2.根据权利要求1所述的豇豆原位转化方法，其特征在于，所述幼苗筛选方法为PCR分析法。
3.根据权利要求1所述的豇豆原位转化方法，其特征在于，所述豇豆品种为金福临门豇豆。
4.根据权利要求2所述的豇豆原位转化方法，其特征在于，所述豇豆品种为金福临门豇豆。
5.根据权利要求1-4任一项所述的豇豆原位转化方法，其特征在于，所述浸染液的制备过程包括以下步骤：
将所述农杆菌在LB固体培养基中活化2-3天，挑适量菌体加入对应抗性的液体LB中过夜培养，得到农杆菌菌液；
将农杆菌菌液在3500rpm条件下离心五分钟，倒掉上清液后，用配置好的IM溶液重悬收集的菌体，稀释至设计浓度，室温避光放置1-3h，得到浸染液。
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