[发明专利]一种生物转化法合成胆红素的方法

权利要求书

1.一种生物转化法合成胆红素的方法，其特征在于所述方法为：将表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌菌株产酶培养后的发酵液离心，收集菌体，经蒸馏水洗涤后作为生物催化剂，以pH 5.8、0.1mol/L的柠檬酸缓冲液为反应介质，加入胆绿素为底物，以甲醇为助溶剂构成转化体系，在35–37℃、100–200r/min恒温振荡条件下转化10–14h，转化反应结束后，将转化液离心，收集菌体，获得含胆红素的菌体，分离提取，获得胆红素。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在转化体系中，所述生物催化剂用量按干菌体重量计为15–18g/L；所述的底物加入终浓度为0.055–0.44g/L，所述助溶剂加入体积终浓度为10％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述生物催化剂按如下方法制备：将表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌接种至含50μg/mL卡那霉素的产酶培养基中，于35–37℃、200–300r/min摇床中培养至OD₆₀₀＝0.6–1.0，加入终浓度为0.5–1.0mmol/L的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷作为诱导剂，在30–32℃，200–300r/min的摇床中表达培养只OD₆₀₀＝6.8–7.5，培养液离心，收集菌体；所述的产酶培养基终浓度组成为：甘油15–20g/L，酵母浸粉15–20g/L，(NH₄)₂SO₄ 3–5g/L，NaCl 3–5g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 10–15g/L，KH₂PO₄ 2–5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5–1.0g/L，溶剂为去离子水，pH 7.2–7.4。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于产酶培养基终浓度组成为：甘油20g/L，酵母浸粉20g/L，(NH₄)₂SO₄ 5g/L，NaCl 5g/L，Na₂HPO₄·12H₂O 15g/L，KH₂PO₄ 3g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，溶剂为去离子水，pH 7.2。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌在产酶培养前，先经活化培养，再经过种子扩大培养，获得种子液再以体积浓度3％–5％的接种量接入产酶培养基进行培养：

(1)活化培养：将表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌接种于含50μg/mL卡那霉素的LB斜面培养基，于37℃恒温培养24h，获得斜面菌体；所述的LB斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 10g/L，琼脂20g/L，溶剂为去离子水，pH 7.2–7.4；

(2)种子扩培：挑取步骤(1)的斜面菌体2环，接种到含50μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，35–37℃、150–200r/min摇床中培养至OD₆₀₀＝4.0–5.0，获得种子液；所述的LB液体培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母浸粉5g/L，NaCl 10g/L，溶剂为去离子水，pH 7.2–7.4。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌为大肠杆菌(Escherichia coli)GDMCC No:61045。