[发明专利]一种干细胞制剂及其在制备治疗肺损伤药物中的应用

权利要求书

1.一种干细胞制剂，其特征在于，所述由牙髓间充质干细胞、紫草素、生理盐水制成；

所述牙髓间充质干细胞的含量为4×10⁵~1×10⁷个/mL；

所述紫草素的含量为0.4~0.8mg/ml。

2.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述牙髓间充质干细胞的含量为5×10⁶个/mL。

3.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述紫草素的含量为0.7mg/ml。

4.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述牙髓间充质干细胞的制备方法为：

S1、将收集到的乳牙用生理盐水清洗干净，夹碎乳牙，取牙髓组织，剪碎成1~3mm³的组织块，用组织块3~6倍体积的组织消化液在温度为36.5~37.5℃、转速为150~300rpm下振荡中消化60~90min；所述组织消化液为0.05%胰蛋白酶溶液；

S2、消化结束后，过滤，1000~1500rpm转速离心6~10min；弃上清，沉淀用培养基Ⅰ重悬，以9000~12000个/mL的密度接种于T25培养瓶中，置于36.5~37.5℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中培养，培养3~4天第一次换液，之后每隔2~3天半换液，待细胞融合度大于80%进行用新鲜的培养基Ⅰ培养传代，培养至P5代，取P3~P5代传代细胞；

S3、再将P3~P5代传代细胞用培养基Ⅱ培养18~30h，收集细胞，即得所述牙髓间充质干细胞。

5.根据权利要求4所述的干细胞制剂，其特征在于，所述培养基Ⅰ包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为DMEM/F12，所述添加物包括5~10mM/ml D-葡萄糖、0.8~1.5mM/ml核黄素、8~15mg/ml大豆卵磷脂、0.3~0.8 mg/ml维生素C、3~6ng/ml干细胞生长因子、2~5ng/ml表皮细胞生长因子。

6.根据权利要求4所述的干细胞制剂，其特征在于，所述培养基Ⅱ包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为DMEM/F12，所述添加物包括5~10mM/ml D-葡萄糖、0.8~1.5mM/ml核黄素、2~6mg/ml白藜芦醇、2~6mg/ml纤连蛋白、8~15mg/ml大豆卵磷脂、0.3~0.8 mg/ml维生素C、3~6ng/ml干细胞生长因子、2~5ng/ml表皮细胞生长因子。

7.根据权利要求1所述的干细胞制剂，其特征在于，所述紫草素的制备方法为：

S11、将紫草洗净，干燥，粉碎至60~100目，得紫草粉末；

S12、将紫草粉末、用于细泡破碎的破碎物、去离子水按照重量比100：2~5：400~700混合，在70~85℃下反应3~6h，得混合物；

S13、将混合物加入到微波提取装置中，加入2~4倍重量于混合物的60~80wt％乙醇溶液，加热至60~70℃，在500~800W的微波功率下提取12~18min，得到提取液；

S14、将提取液浓缩至含水量为10~20%，调节pH至5.5~6.4，以0.8~1.2BV/h上HP-20大孔吸附树脂，洗脱速度为1.5~2.5BV/h，去离子水洗 1.2~2BV，60~80wt％乙醇溶液洗1.5~3BV，收集乙醇洗液，干燥，即得紫草素。

8.根据权利要求7所述的干细胞制剂，其特征在于，所述用于细胞破碎的破碎物由纤维素酶、果胶酶、CTAB按照重量比1：0.5~0.9：0.1~0.4组成。

9.根据权利要求1~8所述的干细胞制剂的制备方法，其特征在于，将紫草素、生理盐水混合均匀，重悬牙髓间充质干细胞，即得干细胞制剂。

10.根据权利要求1~9任一所述的干细胞制剂在制备治疗肺损伤药物中的应用。