[发明专利]一种干细胞制剂及其在制备治疗肺损伤药物中的应用

说明书

本发明公开了一种干细胞制剂及其在制备肺损伤药物中的应用，所述由牙髓间充质干细胞、紫草素、生理盐水制成；所述牙髓间充质干细胞的含量为4×10⁵~1×10⁷个/mL；所述紫草素的含量为0.4~0.8mg/ml。本发明所述的干细胞制剂具有良好的治疗肺损伤作用，通过联用牙髓间充质干细胞、紫草素在治疗肺损伤方面可以达到协同增效作用，紫草素可促进牙髓间充质干细胞向肺损伤部位迁移并增强牙髓间充质干细胞的抗炎性作用，并且还能在一定程度上促进牙髓间充质干细胞增殖，从而二者联用具有协同增效作用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种干细胞制剂及其在制备治疗肺损伤药物中的应用。

背景技术

肺损伤是由多种化学、物理和生物等因素引起的肺部炎症、纤维化等，进而影响肺功能的一类疾病， 严重的威胁着人类健康。

间充质干细胞 （MSCs）是一类来源于发育早期中胚层、具有自我复制和多向分化潜能的非造血干细胞，最常由骨髓中提取，也可以从脂肪组织、脐带组织、肝脏、牙髓等多种组织中获得。研究显示， MSCs 可以通过促进抗炎症稳态和减少氧化应激减少肺损伤。同时MSCs 对免疫细胞具有免疫调节作用。在受损组织释放的趋化因子和 MSCs 表达的趋化因子受体之间的相互作用驱动下，MSCs 优先回到炎症部位。

中药中可能含有大量的促进细胞增殖及分化的成分，在组织工程皮肤的构建和干细胞的体外培养研究中具有重大价值。

紫草素是从紫草的根中提取的主要活性成分，其众多药理作用逐渐被人们所发现，如抗氧化、抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗菌等作用。紫草素是存在于植物紫草中的类化合物。近年来，多项研究表明紫草素对关节炎、神经系统疾病、心血管疾病及败血症等炎症反应有很好 的治疗作用。其机制可能与下调白三烯B4的合成、抑制肥大细胞去颗粒作用、抑制中性粒细胞呼吸爆发，破坏磷脂酰肌醇信号通路和下调NF-κB活化等有关，另有研究表明紫草素可以抑制脂多糖诱导的肺损伤小鼠肺组织NF-κB活化。

目前还没有任何文献以及专利报导牙髓间充质干细胞、紫草素二者联用治疗肺损伤。

发明内容

本发明提供一种干细胞制剂及其在制备治疗肺损伤药物中的应用，所述的干细胞制剂具有良好的治疗肺损伤效果。

本发明解决其技术问题采用以下技术方案：

一种干细胞制剂，所述由牙髓间充质干细胞、紫草素、生理盐水制成；

所述牙髓间充质干细胞的含量为4×10⁵~1×10⁷个/mL；

所述紫草素的含量为0.4~0.8mg/ml。

作为一种优选方案，所述牙髓间充质干细胞的含量为5×10⁶个/mL。

作为一种优选方案，所述紫草素的含量为0.7mg/ml。

作为一种优选方案，所述牙髓间充质干细胞的制备方法为：

S1、将收集到的乳牙用生理盐水清洗干净，夹碎乳牙，取牙髓组织，剪碎成1~3mm³的组织块，用组织块3~6倍体积的组织消化液在温度为36.5~37.5℃、转速为150~300rpm下振荡中消化60~90min；所述组织消化液为0.05%胰蛋白酶溶液；

S2、消化结束后，过滤，1000~1500rpm转速离心6~10min；弃上清，沉淀用培养基Ⅰ重悬，以9000~12000个/mL的密度接种于T25培养瓶中，置于36.5~37.5℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中培养，培养3~4天第一次换液，之后每隔2~3天半换液，待细胞融合度大于80%进行用新鲜的培养基Ⅰ培养传代，培养至P5代，取P3~P5代传代细胞；

S3、再将P3~P5代传代细胞用培养基Ⅱ培养18~30h，收集细胞，即得所述牙髓间充质干细胞。