[发明专利]一种表皮干细胞培养方法

说明书

本发明公开了一种表皮干细胞培养方法，包括以下步骤：将制备的表皮干细胞悬于表皮干细胞培养基中，加入到培养瓶中，将培养瓶置于培养箱中进行培养；所述表皮干细胞的密度为1×10⁴~2×10⁵个/ml；所述表皮干细胞培养基包括基础培养基和添加物。本发明所述的表皮干细胞培养方法，能够有效对表皮干细胞进行扩增，且表皮干细胞活力高；改性石墨烯、铁皮石斛提取物的加入能够显著扩增表皮干细胞，提高其活力，其中改性石墨烯、铁皮石斛提取物二者联用在促进表皮干细胞增殖方面具有显著的协同增效作用。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种表皮干细胞培养方法。

背景技术

经过不断地创新和发展，越来越多的纳米材料被开发并逐渐进入我们的视野，如碳纳米材料、金属纳米材料，以自然界最丰富的碳元素为主要成分的碳纳米材料成分纳米材料领域的重要组成部分，是目前应用非常广泛的材料，石墨烯是一种新兴的纳米材料，今年的研究表明，石墨烯及其衍生物在生物监测、组织工程、药物/基因运送方面具有广泛的应用前景。本公司的另外三个专利CN202010912781.7、CN202010912764.3、CN202010912886.2公开了改性石墨烯可以促进干细胞增殖，首先其扩增的对象胚胎干细胞，其次，其改性方法与本发明大相庭径，其技术效果仅为扩增胚胎干细胞。

中药中可能含有大量的促进细胞增殖及分化的成分，在组织工程皮肤的构建和干细胞的体外培养研究中具有重大价值。目前还没有任何文献以及专利报导改性石墨烯、铁皮石斛提取物二者联用扩增表皮干细胞。

发明内容

本发明提供一种表皮干细胞培养方法，能够有效对表皮干细胞进行扩增，且表皮干细胞活力高。

本发明解决其技术问题采用以下技术方案：

一种表皮干细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

将制备的表皮干细胞悬于表皮干细胞培养基中，加入到培养瓶中，将培养瓶置于培养箱中进行培养；

所述表皮干细胞的密度为1× 10⁴~2× 10⁵个/ml；

所述表皮干细胞培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；所述添加物各组分及浓度为：0.05~0.12mg/L碱性成纤维细胞生长因子、0.1~0.4mg/L表皮生长因子、0.1~0.5mg/L维生素K、0.6~1mg/L氯化血红素、0.6~1.2mg/L亚麻酸、1~ 5 mg/L尼克酰胺、2~6mg/L精氨酸、2~8mg/L改性石墨烯、4~10mg/L铁皮石斛提取物、10~15mg/L谷氨酸、8~12mg/L天冬酰胺、5~20mg/L维生素C。

本发明的发明人在大量的研究中惊奇的发现，改性石墨烯、铁皮石斛提取物二者联用在促进表皮干细胞增殖方面具有显著的协同增效作用。

作为一种优选方案，所述培养瓶为T25培养瓶。

作为一种优选方案，所述添加物各组分及浓度为：0.06~0.12mg/L碱性成纤维细胞生长因子、0.15~0.4mg/L表皮生长因子、0.2~0.5mg/L维生素K、0.7~1mg/L氯化血红素、0.7~1.2mg/L亚麻酸、2~ 5 mg/L尼克酰胺、3~6mg/L精氨酸、3~8mg/L改性石墨烯、5~10mg/L铁皮石斛提取物、12~15mg/L谷氨酸、10~12mg/L天冬酰胺、8~20mg/L维生素C。

作为一种优选方案，所述添加物各组分及浓度为：0.08mg/L碱性成纤维细胞生长因子、0.25mg/L表皮生长因子、0.3mg/L维生素K、0.8mg/L氯化血红素、0.9mg/L亚麻酸、4mg/L尼克酰胺、4.5mg/L精氨酸、6mg/L改性石墨烯、8mg/L铁皮石斛提取物、13mg/L谷氨酸、11mg/L天冬酰胺、15mg/L维生素C。