[发明专利]一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法及其应用在审
申请号: | 202110094094.3 | 申请日: | 2021-01-25 |
公开(公告)号: | CN112630436A | 公开(公告)日: | 2021-04-09 |
发明(设计)人: | 奎书毅 | 申请(专利权)人: | 安士(广州)医疗科技有限公司 |
主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577;G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533 |
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地址: | 510070 广东省广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 定量 检测 tex101 浓度 荧光 试剂 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:所述试剂条包括顺次衔接于PVC底板的样品垫、标记垫、包被膜、吸水纸;
所述标记垫上喷涂有荧光微球标记的第一TEX101单克隆抗体和荧光微球标记的亲和素;
所述包被膜包含检测线和质控线:检测线与质控线之间的间隔为4〜8nm,所述检测线包被有与所述荧光微球标记的第一TEX101单克隆抗体处于不同表位的第二TEX101单克隆抗体,所述质控线包被有特异性识别亲和素的兔抗亲和素抗体。
2.根据权利要求1所述的一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:所述荧光微球标记的第一TEX101单克隆抗体的浓度为0.1〜1.0mg/mL,稀释比例为5%〜20%;所述荧光微球标记的亲和素的浓度为0.1〜1.0mg/mL,稀释比例为0.5%〜5%。
3.根据权利要求2所述的一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:所述含荧光微球标记的第一TEX101单克隆抗体和荧光微球标记的亲和素的标记垫处理液的喷量为3〜6μL/cm。
4.根据权利要求1所述的一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:所述荧光微球的粒径为100〜500nm;所述荧光微球的激发波长为310〜550nm,发射波长为340〜620nm。
5.根据权利要求1所述的一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:所述检测线上包被的第二TEX101单克隆抗体的浓度为0.5〜2 mg/mL,喷量 0.1〜0.2μL/cm;所述质控线上包被的兔抗亲和素抗体的浓度为0.5〜2 mg/mL,喷量为0.1〜1.0L/mm。
6.根据权利要求1所述的一种定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)制备荧光微球标记蛋白:取一定量的荧光微球,10000〜15000 rpm第一次离心5〜15分钟,第一次离心分离得到的沉淀物用pH为6.0〜7.0的10〜100 mM磷酸盐缓冲液调节至浓度为0.1%〜1%,并超声分散;加入终浓度为0.1〜5 mg/mL的碳二亚胺(EDC),混匀,再加入终浓度为0.1〜5 mg/mL的N-轻基琥珀酰亚胺(NHS),混匀;室温孵育20〜40分钟后10000〜15000 rpm第二次离心5〜15分钟,第二次离心分离得到的沉淀物用pH值6.0〜7.0的10〜100mM磷酸盐缓冲液溶解;
将复溶后的荧光微球超声分散,分为两管并按照含0.1〜1.0 mg/mL荧光微球的比例分别加入第一TEX101单克隆抗体和亲和素,混匀后室温旋转混合反应1.5〜3小时,10000〜15000 rpm第三次离心5〜15分钟,第三次离心分离得到的沉淀物用含10〜40 mM乙醇胺和0.05%〜1%酪蛋白的Tris〜HCl(10〜40mM,pH值7.0〜8.0)复溶,超声分散后旋转混合反应0.5〜1小时;10000〜15000 rpm第四次离心5〜I5分钟,第四次离心分离得到的沉淀物用微球保存液复溶,2〜8℃保存;
(2)预处理样品垫:将样品垫用封闭液浸泡5分钟后,置于湿度小于20%、温度在40〜50℃的烘箱中,烘箱干燥12〜24小时后于将样品垫放置于2〜30℃的环境中密封保存;其中,封闭液为含0.1〜1%的Tris、0.1〜1%的Tween20、0.1〜1%的酪蛋白、0.1〜2% 的PEG20000、0.005〜0.05%的鼠抗人红细胞;
(3)制备标记垫:将荧光微球标记的第一TEX101单克隆抗体和荧光微球标记的亲和素分别按5%〜20%和0.5%〜5%的稀释比例用标记垫处理液喷涂在标记垫上,喷量为3〜6 uL/cm;所述标记垫处理液中含有 0.2〜2%的酪蛋白、5%〜20%的蔗糖、0.1〜1%的Tween-20、0.1〜0.5%的PVP40、0.02〜0.05%的Proclin300、0.01 〜0.05M、7.4的PBS缓冲液;将制备好的标记垫置于湿度小于20%、温度为40〜50℃的烘箱中,烘箱干燥12〜24小时后将标记垫放置于2〜30℃的环境中密封保存;
(4)制备包被膜:分别将检测线包被的第二TEX101单克隆抗体和质控线包被的兔抗亲和素用包被缓冲液调节浓度为0.5〜2 mg/mL,将第二TEX101单克隆抗体喷到包被膜上的检测线,将兔抗亲和素抗体喷到包被膜上的质控线,第二TEX101单克隆抗体和兔抗亲和素抗体的用量按膜包被液量均为0.1〜0.2μL/mm,检测线和质控线间隔4〜8mm,将包被膜放置于湿度小于20%、温度为40〜50℃的烘箱中,烘箱干燥24〜72小时后将包被膜放置于2〜30℃的环境中密封保存,备用;
(5)制备试纸条:在PVC底板上顺次相互搭接地黏贴样品垫、标记垫、包被膜和吸水纸得到试纸板,按照切割要求将试纸板切割成3〜4mm宽度的试纸条。
7.根据权利要求1-6任一所述的定量检测TEX101浓度的荧光试剂条的制备方法在精液TEX101的浓度检测中的应用。
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