[发明专利]环γ-聚谷氨酸涂层智能纳米药物输送体系及其制备方法

权利要求书

1.环γ-聚谷氨酸涂层智能纳米药物输送体系的制备方法，其特征在于，是利用聚合物NLS-LA-PpIX制备阳离子载药纳米胶束，再将环γ-聚谷氨酸通过静电作用吸附于阳离子载药纳米胶束表面后得到；所述的环γ-聚谷氨酸为9个谷氨酸残基组成的环状多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的聚合物NLS-LA-PpIX的制备方法为：

(1)树脂溶涨：将2-Chlorotrityl Chloride Resin放入反应管中，加15ml/g DCM，振荡30min；

(2)接第一个氨基酸：通过沙芯抽滤掉溶剂，加入3倍摩尔过量的Fmoc-Gly-OH氨基酸，加入DMF溶解，再加入10倍摩尔过量的DIEA，振荡60min；用甲醇封闭；

(3)脱保护：去掉DMF，加15ml/g 20％哌啶DMF溶液，反应5min，去掉DMF并再加15ml/g20％哌啶DMF溶液，继续反应15min；

(4)检测：抽掉哌啶溶液，取十几粒树脂，用乙醇洗三次，加入检测试剂检测，105℃-110℃加热5min，变深蓝色为阳性反应；

(5)洗涤：10ml/g DMF洗两次，10ml/g DCM洗两次，10ml/g DMF洗两次；

(6)缩合：保护氨基酸三倍过量，HBTU三倍过量，均用尽量少DMF溶解，加入反应管，立刻加入DIEA十倍过量，反应30min；

(7)检测：取十几粒树脂，用乙醇洗三次，加入检测试剂检测，105℃－110℃加热5min，无色为阴性反应；

(8)洗涤：10ml/g DMF洗一次，10ml/g DCM洗两次，10ml/g DMF洗两次；

(9)重复3至6步操作，从右到左依次连接序列中的氨基酸；其中N端第一个氨基酸为Fmoc-Lys(Dde)-OH；同理接完lipoic acid后去dde，继续连接PpIX；

(10)抽干，按照下列方法洗树脂：10ml/g DMF洗两次，10ml/g甲醇洗两次，10ml/g DMF洗两次，10ml/g DCM洗两次，抽干10min；

(11)从树脂上切割聚合物：配制切割液：TFA 95％；水1％；EDT 2％；TIS 2％；切割时间：120min；

(12)吹干洗涤：将裂解液用氮气尽量吹干，用乙醚洗六次，然后常温挥干；

(13)分析提纯：用高效液相色谱将粗品提纯，进行质谱鉴定；

色谱条件：色谱柱：Kromasil 100-5C18，4.6mm×250mm，5micron；流动相Buffer A：0.1％TFA in Acetonitrile；Buffer B：0.1％TFA in water；流速：1.0ml/min；梯度比例为0min 65％B，20min 0％B；进样量：10μL；柱温：25℃；检测波长：220nm；

质谱条件：离子源：ESI源；检测方式：正离子检测；毛细管电压：2.8KV；

锥孔电压：22V；离子源温度：120℃；

(14)冻干：收集目标聚合物溶液放入冻干机中进行浓缩，冻干成白色粉末。

2.根据权利要求1所述的环γ-聚谷氨酸涂层智能纳米药物输送体系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将浓度为0.25mg/ml的环γ-聚谷氨酸水溶液按照体积比4：1在室温搅拌下逐滴滴入浓度为2mg/ml的阳离子纳米胶束水溶液中，1500rpm搅拌30min后将溶液置于透析袋中，透析除去游离的环γ-聚谷氨酸；将溶液冻干即得。

3.根据权利要求1所述的环γ-聚谷氨酸涂层智能纳米药物输送体系的制备方法，其特征在于，所述的阳离子载药纳米胶束为载阿霉素纳米胶束NLS-LA-PpIX-DOX。

4.根据权利要求3所述的环γ-聚谷氨酸涂层智能纳米药物输送体系的制备方法，其特征在于，所述的载阿霉素阳离子纳米胶束的制备方法为：称取2mg聚合物NLS-LA-PpIX溶于800μl二氯甲烷中，在强力搅拌条件下，将阿霉素二氯甲烷溶液缓慢滴加入聚合物溶液中，之后将所得溶液在强力搅拌条件下逐滴滴加入纯水，使得终体积VR_{二氯甲烷/H2O}＝1：1，边搅拌边挥发完全除去二氯甲烷后将溶液转入透析袋，透析除去未包载的DOX，冻干即得到载阿霉素纳米胶束。