[发明专利]检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条及制备方法

权利要求书

1.检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将氯金酸溶液加热后加入柠檬酸三钠制备胶体金溶液；

将所述胶体金溶液加入K₂CO₃、抗2019-nCoV单抗以及聚乙二醇制备2019-nCoV免疫胶体金溶液；

将所述2019-nCoV免疫胶体金溶液预处理后，将所述溶液用喷金机按2.3μL/cm的喷金量喷涂到聚酯膜标记垫上，形成2019-nCoV免疫胶体金垫；

将抗2019-nCoV单抗预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜检测线；

将羊抗鼠IgG预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜质控线，得到硝酸纤维素膜；

将吸水纸制成的样品垫、2019-nCoV免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴到PVC胶板上，组装成试纸条。

2.根据权利要求1所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述将氯金酸溶液加热后加入柠檬酸三钠制备胶体金溶液步骤包括：将50mL的质量分数0.01％氯金酸加热沸腾，加入0.55mL的质量分数1％柠檬酸三钠后混匀，再保持沸腾30min，得到胶体金溶液。

3.根据权利要求1所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，将所述胶体金溶液加入K₂CO₃、抗2019-nCoV单抗以及聚乙二醇制备2019-nCoV免疫胶体金溶液步骤包括：

取50mL所述胶体金溶液，用0.1M的K₂CO₃将其pH值调至7-8，边搅拌边加入2-4mL的1mg/mL的抗2019-nCoV单抗，搅拌30-45min得到混合溶液；

向所述混合溶液逐滴加入1-2mL 25M分子量为20000的聚乙二醇，再搅拌15-20min；

将搅拌后的溶液在4℃、20000rpm离心15min，弃上清液得到悬浮液；

之后向所述悬浮液加入10mL pH＝7.4且含0.4M PEG 20000的PBS缓冲液，在4℃、20000rpm离心15min，去上清，沉淀重复用PBS缓冲液悬浮以及离心；

向离心后的溶液中加入5-8mL pH＝7.4且含2-5％BSA的PBS缓冲液溶解沉淀，用0.22μm无菌过滤器过滤后，滤液即为免疫胶体金溶液，于4℃保存备用。

4.根据权利要求1所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，所述2019-nCoV免疫胶体金溶液预处理包括2019-nCoV免疫胶体金溶液用含30-50％蔗糖的0.01M pH＝7.4的PBS缓冲液稀释8-10倍。

5.根据权利要求1所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，将抗2019-nCoV单抗预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜检测线包括：

将1.0mg/mL抗2019-nCoV单抗用含5％蔗糖的0.01M pH＝7.4的PBS缓冲液稀释6倍，用划膜机点在硝酸纤维素膜检测线即T线上。

6.根据权利要求5所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，将羊抗鼠IgG预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜质控线，得到硝酸纤维素膜包括：

将1.2mg/mL的羊抗鼠IgG用含2％蔗糖的0.01M pH＝7.4的PBS缓冲液稀释5-8倍，用划膜机点在硝酸纤维素膜质控线即C线上，使T线和C线相距5mm。

7.根据权利要求1所述的检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，其特征在于，将吸水纸制成的样品垫、2019-nCoV免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴到PVC胶板上，组装成试纸条还包括：

将PVC胶板切割成60mm×3mm的条带后组装成试纸条。