[发明专利]检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条及制备方法

说明书

本申请提供一种检测2019‑nCoV抗体的胶体金试纸条及制备方法，方法包括以下步骤：将氯金酸溶液加热后加入柠檬酸三钠制备胶体金溶液；将所述胶体金溶液加入K₂CO₃、抗2019‑nCoV单抗以及聚乙二醇制备2019‑nCoV免疫胶体金溶液；将所述2019‑nCoV免疫胶体金溶液预处理后，将所述溶液用喷金机按2.3μL/cm的喷金量喷涂到聚酯膜标记垫上，形成2019‑nCoV免疫胶体金垫；将抗2019‑nCoV单抗预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜检测线；将羊抗鼠IgG预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜质控线，得到硝酸纤维素膜；将吸水滤纸制成的样品垫、2019‑nCoV免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水滤纸依次粘贴到PVC胶板上，组装成试纸条。

技术领域

本申请涉及病毒微生物技术领域，尤其涉及一种检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条及制备方法。

背景技术

一种新型冠状病毒随后被确定为致病病原体，暂时命名为2019年新型冠状病毒(2019-nCoV)。随着2019-nCoV的出现，实时RT-PCR仍然是许多可用诊断平台中诊断新病毒株的主要手段，RT-PCR标本采集的时间和类型对2019-nCoV的诊断具有重要意义。结果发现，呼吸道标本早期病毒阳性，血清阴性。它还表明，在发病初期，患者尽管症状轻微，但病毒水平很高。除了目前常用的诊断MERS-CoV的RT-PCR方法外，还有四项研究确定了不同的诊断方法，如逆转录环介导的等温扩增(RT-LAMP)、RT-绝热等温PCR(RT-iiPCR)、基于特异性TaqMan探针的一步RT-PCR检测等。

随着2019-nCoV的发展，各个实验室诊断可通过以下方法进行：(a)检测病毒的遗传物质，(b)检测中和感兴趣病毒颗粒的抗体，(c)使用抗体检测感兴趣的病毒表位(血清学检测)，或(d)培养和分离活病毒颗粒。遗传物质检测的主要局限性是缺乏对活病毒存在的知识，与非特异性遗传区域的潜在交叉反应性，以及在急性感染阶段的短时间内准确检测。血清学检测的主要局限性是需要从调查病例中收集成对的血清样本(在急性期和恢复期)以进行确认，以消除过去接触和/或其他冠状病毒感染的非特异性抗体的潜在交叉反应。病毒培养和分离的局限性是需要技术人员长时间和高度专业化的技能来处理样本。

发明内容

本申请提供了一种检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条及制备方法，以解决针对2019-nCoV病毒培养和分离的局限性是需要技术人员长时间和高度专业化的技能来处理样本的问题。

一方面，本申请提供一种检测2019-nCoV抗体的胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：

将氯金酸溶液加热后加入柠檬酸三钠制备胶体金溶液；

将所述胶体金溶液加入K₂CO₃、抗2019-nCoV单抗以及聚乙二醇制备2019-nCoV免疫胶体金溶液；

将所述2019-nCoV免疫胶体金溶液预处理后，将所述溶液用喷金机按2.3μL/cm的喷金量喷涂到聚酯膜标记垫上，形成2019-nCoV免疫胶体金垫；

将抗2019-nCoV单抗预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜检测线；

将羊抗鼠IgG预处理后用划膜机点在硝酸纤维素膜质控线，得到硝酸纤维素膜；

将吸水纸制成的样品垫、2019-nCoV免疫胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘贴到PVC胶板上，组装成试纸条。

可选的，所述将氯金酸溶液加热后加入柠檬酸三钠制备胶体金溶液步骤包括：将50mL的质量分数0.01％氯金酸加热沸腾，加入0.55mL的质量分数1％柠檬酸三钠后混匀，再保持沸腾30min，得到胶体金溶液。

可选的，将所述胶体金溶液加入K₂CO₃、抗2019-nCoV单抗以及聚乙二醇制备2019-nCoV免疫胶体金溶液步骤包括：