[发明专利]一种人体病菌培养毒株检测方法

说明书

本发明公开了一种人体病菌培养毒株检测方法；S1、对病菌进行无菌环境下的培养；S2、在培养结束后对培养的病菌进行稀释取样；S3、将稀释试管中的病菌置于混合容器中进行快速的混合；S4、在稀释过后，将稀释的病菌溶液置于离心机上进行离心；S5、在离心处理过后对两组病菌溶液进行分别处理；S6、通过两种检测方式，实现对病菌进行有效的检测，并且对比两种检测结果；本发明通过对病菌进行培养，通过对病菌的培养实现对病菌的繁衍，便于对病菌进行多种检测使用，且本发明通过多种检测方式实现对病菌进行有效的检测，并且通过多种检测方式进行中和比对，完成对检测结果的正确性。

技术领域

本发明属于病菌检测技术领域，具体涉及一种人体病菌培养毒株检测方法。

背景技术

病菌是引起人类疾病的细菌和病毒，统称为病原菌或致病菌。细菌在人体内寄生，增殖并引起疾病的特性称为细菌的致病性或病原性。致病性是细菌种的特征之一，具有质的概念，如鼠疫细菌引起鼠疫，结核杆菌引起结核。致病性强弱程度以毒力表示，是量的概念。各种细菌的毒力不同，并可因宿主种类及环境条件不同而发生变化。同一种细菌也有强毒、弱毒与无毒菌株之分。细菌的毒力常用半数死量或半数感染量表示，其含义是在单位时间内，通过一定途径，使一定体重的某种实验动物半数死亡或被感染所需的最少量的细菌数或细菌毒素量。病原菌的致病作用与其毒力、侵入机体的数量、侵入途径及机体的免疫状态密切相关，且在研究病菌的时候，需要对病菌进行培养，并且在对病菌培养结束之后，需要对病菌进行检测，尤其是对流感病菌更是需要大量的研究，然而市面上各种的流感病菌的检测方法仍存在各种各样的问题。

如授权公告号为CN101449164A所公开的流感病毒的检测方法，其虽然实现了通过特定的结合分子将病毒和/或病毒颗粒与支持物结合，结合分子结合该病毒和/或病毒颗粒的血凝素组分；以及通过将神经氨酸酶组分与其酶底物反应产生可检测的信号来检测所结合的病毒和/或病毒颗粒。本发明还涉及应用本发明的方法来快速检测流感病毒和/或病毒颗粒的检测系统以及根据本发明的检测系统的用途，但是并未解决现有存在的对于病毒菌的培养的过程，以及对与病菌的检测方式单一，通过单一的检测方式实现对病菌定论等的问题，为此我们提出一种人体病菌培养毒株检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人体病菌培养毒株检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种人体病菌培养毒株检测方法，包括有以下步骤：

S1、对病菌进行无菌环境下的培养：通过一个无菌和无通过一个无菌和无RNA酶的试管或者是培养基对病菌进行培养，然后向试管中添加流感培养溶液，或者在培养基中添加固定培养液或者在培养基中添加固定培养液，然后向试管中或者是培养基中添加流感病毒；

S2、在培养结束后对培养的病菌进行稀释取样：将试管或者是培养基中培养获得的病菌族群进行取样，然后将病菌添加进入到稀释试管中进行稀释，且稀释试管中添加有稀释溶液；

S3、将稀释试管中的病菌置于混合容器中进行快速的混合：将S2中的稀释试管密封置于旋转混合设备上进行充分的混合，且混合设备的转动保持在100-300r/min，混合时长为3-5min；

S4、在稀释过后，将稀释的病菌溶液置于离心机上进行离心：将S3中混合稀释过后的病菌溶液分成两份，一份稀释后的病菌溶液置于试管中进行离心处理，另一份在进行破壁之后再置于试管中进行离心处理；

S5、在离心处理过后对两组病菌溶液进行分别处理：将未破壁的病菌溶液取底层的细胞溶液10-20ul置于特福龙涂层的12孔显微镜载玻片的孔洞内，然后每组孔洞内依次添加10-20ul的流感特异性抗体和10-20ul的兔抗鼠荧光结合物，再加入0.1％伊纹氏蓝做负液，将破壁的病菌溶液提取上成溶液，置于PCR设备中进行核酸检测；

S6、通过两种检测方式，实现对病菌进行有效的检测，并且对比两种检测结果：将核酸检测结果和荧光检测结果进行对比，并且结合两种检测结果，判断病菌毒株的存在。