[发明专利]一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法

权利要求书

1.一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，包括以下步骤：

(1)神经节苷脂猪脑提取物经正向不定型硅胶首次纯化，后经辛烷基键合硅胶反相填料分离得神经节苷脂粗品；

(2)神经节苷脂粗品使用阳离子树脂进行离子交换，使用10k中空纤维超滤膜超滤进行精制，得到高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。

2.如权利要求1所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)猪脑经提取、萃取、水解后得猪脑提取物，备用；

(2)取无定形硅胶，用甲醇匀浆后装柱，使用三氯甲烷、甲醇和水的混合液做流动相进行平衡，取猪脑提取物用水加热溶解，用流动相进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩至粘稠，加入丙酮，静置沉淀，得到神经节苷脂粗品1；

(3)神经节苷脂粗品1溶解后，使用高压动态轴向压缩柱反相填料，以三氟乙酸甲醇溶液和水的混合溶液进行洗脱，收集洗脱液，并对洗脱液依据HPLC高效液相色谱法进行检测；将洗脱液合并后减压浓缩至粘稠，加入丙酮，静置沉淀，得到神经节苷脂粗品2；

(4)粗品2加纯化水溶解后，加入活性炭，搅拌后，过滤，浓缩，加入丙酮沉淀，得神经节苷脂粗品3；

(5)用阳离子树脂装柱后，使用盐酸水溶液冲洗阳离子树脂柱，将神经节苷脂粗品3溶解上样，使用盐酸水溶液进行洗脱，收集洗脱液，超滤，至检测超滤液电导率≤10us/cm时停止超滤，得超滤液，将超滤液减压浓缩至粘稠液后加入丙酮，静置沉淀，过滤，干燥，得到高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。

3.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(2)中，所述无定型硅胶的目数为200-300目；所述三氯甲烷、甲醇和水的体积比为65-68：30-33：3-6；所述加热的温度为30-60℃；所述猪脑提取物与水加入比例为水：猪脑提取物＝1L：80-120g(v：w)；所述流动相进行洗脱以20-60mL/min的流速进行；所述加入丙酮的体积为浓缩液体积的5-10倍。

4.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(2)中，所述三氯甲烷、甲醇和水的体积比为68：33：6；

所述加热的温度为50℃；所述猪脑提取物与水加入比例为水：猪脑提取物＝1L：100g(v：w)；所述流动相进行洗脱以40mL/min的流速进行；所述加入丙酮的体积为浓缩液体积的10倍。

5.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(3)中，所述反相填料为辛烷基键合硅胶反相填料粒径为10μm，孔径为0.5％三氟乙酸甲醇溶液和水的体积比为(68-70)：(30-32)的流动相，柱规格为50×1000mm，紫外检测波长为205nm；所述洗脱以60-100mL/min的流速进行；所述加入丙酮的体积为浓缩液体积的5-10倍。

6.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(3)中，所述洗脱以80mL/min的流速进行；步骤(3)中，所述高效液相色谱法进行检测的色谱条件为用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(32:68)为流动相A，以乙腈为流动相B；流速为每分钟1.2ml；检测波长为205nm；步骤(3)中，所述丙酮的体积为浓缩液体积的10倍。

7.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(4)中，所述活性炭为针用活性炭，加入量为粗品2质量的3-5％。

8.如权利要求2所述的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，其特征在于，步骤(4)中，所述活性炭为针用活性炭，加入量为粗品2质量的5％。