[发明专利]一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法

说明书

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法。该方法包括以下步骤：(1)神经节苷脂猪脑提取物经正向不定型硅胶首次纯化，后经辛烷基键合硅胶反相填料分离得神经节苷脂粗品；(2)神经节苷脂粗品使用阳离子树脂进行离子交换，使用10k中空纤维超滤膜超滤进行精制，得到高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。该方法制备的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠具有较高的纯度，产品质量较高，适用于推广应用。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法。

背景技术

单唾液酸四己糖神经节苷脂(Monosialotetrahexosylganglioside，GM1)是一种含唾液酸的糖神经鞘脂类物质，是已知的唯一能穿透血脑屏障的神经节苷脂。广泛存在于哺乳类动物的细胞膜上，尤以神经系统含量最为丰富，镶嵌于细胞双层脂质膜结构中，是神经细胞的重要组成成分之一，约占总脂质的10％。GM1在人体神经系统发生、生长、分化和再生过程中起着必不可少的作用。多年的实验及临床报道显示，GM1可促进受损神经恢复，具有促进神经重塑作用，是参与神经病变修复的主要物质之一。

现有技术中制备药用GM1可从哺乳动物脑中提取，具有积极的工业价值。不同哺乳动物来源的脑组织中GM1的含量有差异，但有资料显示猪脑组织提取的GM1与人源性GM1在结构和组成，特别是唾液酸的类型等方面完全一致。因此，从动物脑组织作为原料提取GM1，不会存在免疫原性和异常毒性反应。根据文献报道，牛脑中GM1含量相对其它牲畜较高，但鉴于牛源性病毒，如疯牛病等对人体健康的严重危害，一般选用相对较安全的猪脑为原料。

单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法一般分为提取和纯化两个步骤；如中国专利申请CN103524572A公开了一种高纯度的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法，是以新鲜猪脑为原料经过提取步骤和纯化步骤进行制备，其中提取步骤包括制丙酮粉步骤、组织总脂的抽提步骤、folch分配步骤、脱病毒步骤、酸水解病毒灭活步骤；纯化步骤包括脱盐步骤、硅胶层析步骤、反相层析步骤、浓缩步骤、丙酮重结晶步骤、冻干步骤。中国专利申请CN102731584A中公开一种制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM1)的方法，具体包括猪脑丙酮粉的制备、总神经节苷脂浓缩液的制备和酸水解步骤。

现有技术的制备方法中虽然取得了一定的技术效果，但仍存在或多或少的质量问题。由于临床上使用的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠对人体具有较大的影响，使用纯度要求较高，因此，对单唾液酸四己糖神经节苷脂钠精制技术的改进具有重要的意义。

发明内容

为克服以上技术问题，本发明提供了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法。制成的单唾液酸四己糖神经节苷脂钠具有较高的纯度，产品质量较高，适用于推广应用。

为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：

一种单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，包括以下步骤：

(1)神经节苷脂猪脑提取物经正向不定型硅胶首次纯化后，后经辛烷基键合硅胶反相填料分离得神经节苷脂粗品；

(2)神经节苷脂粗品使用阳离子树脂进行离子交换，使用10k中空纤维超滤膜超滤进行精制，得到高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠。

优选地，所述单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的精制方法，包括以下步骤：

(1)猪脑经提取、萃取、水解后得猪脑提取物，备用；

(2)取无定形硅胶，用甲醇匀浆后装柱，使用三氯甲烷、甲醇和水的混合液做流动相进行平衡，取猪脑提取物用水加热溶解，用流动相进行洗脱，收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩至粘稠，加入丙酮，静置沉淀，得到神经节苷脂粗品1；