[发明专利]一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法

说明书

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法。具体步骤包括：S1.制备MM3培养基；S2.增扩培养；S3.诱导分化培养；S4.染色鉴定。本发明通过提供一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法，能够解决分化过程中细胞卷缩成团的问题，提高成骨诱导效率。该方法能够对不同来源(脐带、脂肪、胎盘、羊膜)的人间充质干细胞的诱导分化成骨进行分化和鉴定，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法。

背景技术

干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞；干细胞是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的始祖细胞。间充质干细胞(MSC_s)作为一种多能干细胞，具有干细胞的所有共性：自我更新和多向分化能力。间充质干细胞被广泛应用于临床，与造血干细胞联合应用已被证明能够提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且未引发不良反应。间充质干细胞应用于临床研究已成为安全有效的治疗技术。间充质干细胞可以分化为骨、软骨、肌肉或肌腱，为临床治疗各种创伤提供细胞来源。现有技术研究发现，间充质干细胞具有明显的增殖快特点，应用于体内植入和体外培育均具有很强的成骨能力，因此成为骨组织工程中重要的种子细胞。

中国专利CN 102041245A公开了一种间充质干细胞成骨诱导培养基及使用方法，该培养基在α-MEM培养基基础上，添加特定量胎牛血清、Vc溶液、地塞米松等诱导培养后，进行成骨细胞染色鉴定。该方法的诱导培育周期为1个月左右，且仅针对于骨髓来源间充质干细胞进行成骨诱导分化，实际应用于临床治疗时具有效率较低、对来源要求较高的使用缺陷；中国专利CN 10748928A公开了一种人间充质干细胞成骨诱导分化培养基及制备方法，该培养基包括α-MEM/HG-DMEM培养基，添加过滤除菌后的胎牛血清、Vc溶液、地塞米松等原料诱导培养，达到在成骨诱导分化培育较短时间内出现大量骨钙结节的效果。该方法的成骨诱导分化培育效率高，但是诱导速度的提升伴随的是容易出现细胞分化开始后细胞数量过多，在分化过程中细胞卷缩成团的现象。

基于此，探究一种诱导分化效果理想、定向诱导成骨分化特异性强的体外诱导分化成骨方法，为临床应用人间充质干细胞分化诱导成骨创造条件，成为本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明通过提供一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法，解决了现有体外诱导人间充质干细胞诱导成骨的过程中，细胞容易卷缩成团、诱导效果不理想的问题，得到了一种诱导分化效果理想、定向诱导成骨分化特异性强的体外诱导分化成骨方法。

本发明第一方面提供了一种体外诱导人间充质干细胞分化成骨的方法，具体步骤包括：

S1.制备MM3培养基；

S2.增扩培养；

S3.诱导分化培养；

S4.染色鉴定。

在一种优选的实施方式中，所述MM3培养基的原料包括营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基。

在一种优选的实施方式中，所述营养成分包括胎牛血清和/或血清替代物。

在一种优选的实施方式中，所述营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基的体积比为1：(15-25)。

在一种优选的实施方式中，所述增扩培养的操作条件为：使用孔板以3-8×10⁴/孔的密度接入人间充质干细胞。

在一种优选的实施方式中，所述诱导分化培养需要定期更换培养基，更换培养基的周期为1-4天。