[发明专利]佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法

权利要求书

1.佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、混合对照品溶液

精密称取印美定、石胺松、凌德草碱、刺凌德草碱、N-氧化凌德草碱、N-氧化刺凌德草碱、N-氧化印美定和N-氧化石胺松的对照品适量，分别以50％甲醇水配成一定浓度的对照品储备液，分别精密称取各对照品储备液适量，用50％甲醇水配成一定浓度的混合对照品溶液；

步骤2、供试品溶液

取佩兰药材不同部位适量，粉碎过4号筛，将适量佩兰粉末置于具塞锥形瓶中，加入0.05mol·L^–1硫酸溶液，超声提取，过滤，取续滤液进行SPE-PCX的富集纯化，收集洗脱液并浓缩，用50％甲醇水稀释定容至一定体积的量瓶中，过微孔滤膜，即得；

步骤3、测定

分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各1μl，注入超高效液相色谱与质谱联用仪，测定，记录30min的色谱图，依据外标法计算印美定、石胺松、凌德草碱、刺凌德草碱、N-氧化凌德草碱、N-氧化刺凌德草碱、N-氧化印美定和N-氧化石胺松的含量；

其中，色谱-质谱条件——色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；柱温：40℃；流动相：0.05％甲酸和2.5mmol·L^–1甲酸铵的水溶液(A)及含0.05％甲酸和2.5mmol·L^–1甲酸铵的乙腈(B)，梯度洗脱条件为：0～16min，0％B→4％B；16～25min，4％B→20％B；流速：0.3mL·min^–1；进样量：1μL；质谱离子源为电喷雾离子化源，正离子，多反应监测模式，毛细管电压3.0kV，离子源温度150℃，去溶剂温度500℃；

印美定、石胺松、凌德草碱、刺凌德草碱、N-氧化凌德草碱、N-氧化刺凌德草碱、N-氧化印美定和N-氧化石胺松的质谱条件如下表：

2.根据权利要求1所述的佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法，其特征在于，SPE-PCX的富集纯化过程为：甲醇活化SPE-PCX小柱，0.05mol·L^–1硫酸溶液平衡小柱，将续滤液上柱，以甲醇淋洗除杂，8％氨水-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液并浓缩。