[发明专利]佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法

说明书

佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法，包括以下步骤：(1)配制含有印美定、石胺松、凌德草碱、刺凌德草碱、N‑氧化凌德草碱、N‑氧化刺凌德草碱、N‑氧化印美定和N‑氧化石胺松的混合对照品溶液；(2)将佩兰粉末置于具塞锥形瓶中，加入0.05mol·L^–1硫酸溶液，超声提取，过滤，取续滤液进行纯化；(3)测定，色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；柱温：40℃；流动相：0.05％甲酸和2.5mmol·L^–1甲酸铵的水溶液(A)及含0.05％甲酸和2.5mmol·L^–1甲酸铵的乙腈(B)，梯度洗脱；流速：0.3mL·min^–1；进样量：1μL；质谱检测。该方法为佩兰药材安全用药提供科学依据。

技术领域

本发明涉及中药材质量检测领域，具体涉及佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法。

背景技术

佩兰为菊科泽兰属植物轮叶泽兰Eupatorium fortunei Turcz.的干燥地上部分，是《中国药典》2020年版一部收载品种，具有芳香化湿，醒脾开胃，发表解暑的功效，用于湿浊中阻，腕痞呕恶，口中甜腻，口臭，多涎，暑湿表证，湿温初起，发热倦怠，胸闷不舒等疾病的治疗。佩兰产于山东、江苏、浙江、江西、湖北、湖南、云南、四川、贵州、广西、广东及陕西，野生罕见，栽培者多。野生者生路边灌丛及山沟路旁。全株及花揉之有香味，似薰衣草。佩兰是一种古老常见的芳香化湿药，一开始作为香囊佩戴在身上，作为药品以“兰草”为名始载于《神农本草经》，列为上品。由于佩兰特殊的香气和一定的疗效，佩兰被收录于国家卫健委公布的可用于保健食品的物品名单目录中，目前已有清咽和免疫调节等保健食品配方中使用该药材作为原料。佩兰的化学成分报道较多，主要含有挥发油、单萜、苯丙素和吡咯里西啶生物碱类等多种化合物。

吡咯里西啶生物碱(Pyrrolizidine alkaloids，PAs)广泛存在于多种植物中，据统计，世界上约有3％的有花植物即6000余种植物含有PAs。迄今为止，PAs已在13个科的植物中检出，多数属于紫草科、菊科千里光族(千里光属、狗舌草属、橐吾属及泽兰属)和豆科。西方植物药研究者把含有PAs的植物称为PA植物。在吡咯啶环的1，2位为双键的PAs具有肝脏毒性，称为肝毒性吡咯里西啶生物碱(Hepatotoxic pyrrolizidine alkaloids，HPAs)，至今已报道的HPAs有600多种。HPAs可引起不可逆的肝细胞损伤，并导致肝窦阻塞综合征(Hepatic sinusoidal obstruction syndrome，HSOS)、肝巨细胞症、肝纤维化和肝硬化等不良后果。国内因服用含有HPAs的中药，如菊三七(又名土三七)、千里光等引起HSOS的病例每年都有报道，近年来中国知网(CNKI)收载的因服用中药导致HSOS的病例就近千例。除肝毒性，PAs还对肺、心、肾、胰、脑等具有毒性及明显的致癌、致突变、致畸胎作用；如长期服用，该药材存在较大安全风险。早在1992年，Liu等从佩兰中分离鉴定了凌德草碱(Rinderine)、7-O-乙酰凌德草碱(7-O-Acetylrinderine)、仰卧天芥菜碱(Supinine)等3种吡咯里西啶生物碱成分，Avula等人建立UHPLC-HRMS法从佩兰的根中鉴定并测定了印美定和石胺松等2种吡咯里西啶生物碱的含量。已有文献报道，佩兰能引起牛羊慢性中毒，侵害肝肾而产生糖尿病；鲜叶或干叶的醇浸出物含有毒性成分，具有急性毒性，家兔给药后能使其麻醉，甚至抑制呼吸，使心率减慢，体温下降，血糖过多而引起糖尿诸症。因此，佩兰中的毒性成分应引起重视。

发明内容

本发明的目的在于提供一种佩兰中吡咯里西啶生物碱的测定方法，该方法采用UPLC-MS/MS法测定佩兰中印美定、石胺松、凌德草碱、刺凌德草碱、N-氧化凌德草碱、N-氧化刺凌德草碱、N-氧化印美定和N-氧化石胺松8种吡咯里西啶生物碱含量，其中化合物刺凌德草碱、N-氧化凌德草碱、N-氧化刺凌德草碱、N-氧化印美定和N-氧化石胺松为首次从佩兰中发现并测定其含量，该方法的提供能够为佩兰药材的质量评价及安全用药提供科学依据。

为实现上述目的，本发明是采用如下技术方案实现的：