[发明专利]一种耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板

权利要求书

1.一种耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板，包含特异性显色底物和选择性培养基；其中，所述选择性培养基，由以下组分组成：蛋白胨，氯化钠，乳糖，牛肉浸粉，琼脂粉，纯化水，酵母提取物，水杨苷，阿拉伯胶，柠檬酸钠，二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，叶酸，维生素B1，维生素E和碳青霉烯类抗生素；

按照重量份数计，蛋白胨5-15份、氯化钠5-10份、乳糖1-5份、牛肉浸粉5-10份、琼脂粉10-15份、纯化水1000-1500份；酵母提取物5-10份、水杨苷0.1-2份、阿拉伯胶0.5-2份、柠檬酸钠1-5份、叶酸0.01-0.05份、维生素B1 0.01-0.05份、维生素E 0.01-0.05份；

所述碳青霉烯类抗生素为亚胺培南、美罗培南和厄他培南的混合物；其中，所述亚胺培南的有效浓度为0.1-50mg/L；所述美罗培南的有效浓度为0.1-50mg/L；所述厄他培南的有效浓度为0.1-30mg/L；

所述二甲基甲酰胺或二甲基亚砜的浓度为0.1ml/L-0.5ml/L；

其中，所述酵母提取物的制备方法，包括以下步骤：

（1）取酵母乳液，恒温自溶，酶解；制得酶解液；

（2）取酶解液的上清液，减压浓缩，制得酵母提取液；

所述自溶过程中还包括加入自溶促进剂，所述促进剂为柠檬酸和氯化钾的混合物；

所述柠檬酸的用量为酵母乳液的0.05-0.1g/L；所述氯化钾的用量为酵母乳液的0.1-0.2g/L；所述酶解用酶为β-木糖苷酶、木瓜酶和葡聚糖酶。

2.如权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板，其特征在于，所述恒温自溶的温度为40-60℃；

所述β-木糖苷酶、木瓜酶和葡聚糖酶的质量比为1：2-3：1-2；所述β-木糖苷酶、木瓜酶和葡聚糖酶的总质量为0.05-0.1g/L 酵母乳液；所述β-木糖苷酶、木瓜酶和葡聚糖酶的酶活力分别为5000-20000U/g；所述酶解的温度为30-45℃；所述酶解的pH值为5-7。

3.如权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板，其特征在于，所述恒温自溶的温度为45℃；所述酶解的温度为35℃；所述酶解的pH值为6.5。

4.如权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板，其特征在于，

所述特异性显色底物为5-溴-6-氯3-吲哚-β葡萄糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β半乳糖苷；

其中，5-溴-6-氯3-吲哚-β葡萄糖苷的浓度为0.01-5.00g/L，5-溴-4-氯-3-吲哚-β半乳糖苷的浓度为0.01-5.00 g/L。

5.如权利要求1所述的耐碳青霉烯类抗生素肠杆菌科细菌的筛查显色平板的制备方法，包括以下步骤：

（1）在纯化水中加入蛋白胨、氯化钠、乳糖、牛肉浸粉、琼脂粉、纯化水；酵母提取物、水杨苷、阿拉伯胶、柠檬酸钠、叶酸、维生素B1、维生素E，加入显色底物，再添加二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；配制培养基，

（2）将培养基进行高压灭菌；

（3）取碳青霉烯类抗生素，加纯化水溶解，过滤除碳青霉烯类抗生素菌，制得抗生素溶液；

（4）将抗生素溶液添加到培养基中，混合均匀，分装平板，即可。