[发明专利]一种表达细胞因子组合物的NK滋养层细胞及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202110112417.7 | 申请日： | 2021-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN112779224A | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 赵礼军;熊建民;王蓓蕾 | 申请（专利权）人： | 河南省华隆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/62;C12N15/12;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 453000 河南省新*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 表达 细胞因子 组合 nk 滋养 细胞 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种NK滋养层细胞，其特征在于，所述NK滋养层细胞表达膜蛋白CD19、CD86、IL21、CD64和CD137L；
所述CD19包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；
所述CD86包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的NK滋养层细胞，其特征在于，所述IL-21通过与CD8α跨膜区形成IL-21-CD8α融合蛋白表达在所述NK滋养层细胞表面；
优选地，所述IL-21-CD8α包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD64包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
优选地，所述CD137L包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体用于制备权利要求1或2所述的NK滋养层细胞；
优选地，所述表达载体包括：
第一表达载体，包括串联的CD19编码序列和CD86编码序列，CD19编码序列和CD86编码序列之间通过间隔序列连接；
第二表达载体，包括IL-21-CD8α编码序列；
第三表达载体，包括CD64编码序列；
第四表达载体，包括CD137L编码序列。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述串联的CD19编码序列和CD86编码序列包括SEQ ID NO:6所示的核酸序列；
优选地，所述IL-21-CD8α编码序列包括SEQ ID NO:7所示的核酸序列；
优选地，所述CD64编码序列包括SEQ ID NO:8所示的核酸序列；
优选地，所述CD137L编码序列包括SEQ ID NO:9所示的核酸序列。
5.根据权利要求3或4所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的空载体为pCDH。
6.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒由转染有权利要求3-5任一项所述的表达载体和辅助质粒的哺乳动物细胞制备得到。
7.一种权利要求1或2所述的NK滋养层细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将权利要求5所述的表达载体和/或权利要求6所述的重组慢病毒导入K562细胞的步骤。
8.一种NK细胞培养基，其特征在于，所述NK细胞培养基包括权利要求1或2所述的NK滋养层细胞。
9.根据权利要求8所述的NK细胞培养基，其特征在于，所述NK细胞培养基还包括基础培养液；
优选地，所述NK细胞培养基还包括血清和/或抗生素；
优选地，所述抗生素包括硫酸庆大霉素。
10.权利要求1或2所述的NK滋养层细胞、权利要求3-5任一项所述的表达载体、权利要求6所述的重组慢病毒或权利要求8所述的NK细胞培养基中的任意一种或至少两种的组合在培养NK细胞中的应用。
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