[发明专利]一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法

权利要求书

1.一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)使用透明质酸酶对透明质酸凝胶进行酶降解处理；

(2)取等量经步骤(1)酶降解获得的样品，分为降解组和总糖组，降解组加入分离剂，总糖组加入与所述分离剂等量的水，两组各自混合均匀后离心，取上清，用水稀释后待检测；

(3)通过咔唑显色反应测定步骤(2)降解组和总糖组待检测样品中葡萄糖醛酸的吸光度值，降解组吸光度值与总糖组吸光度值的比值即为透明质酸凝胶的体外降解率。

2.根据权利要求1所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(1)中，透明质酸酶配置成浓度为2-15U/mL的溶液进行酶降解处理。

3.根据权利要求2所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(1)中，取透明质酸凝胶，加入磷酸盐缓冲液和透明质酸酶溶液，37℃恒温振荡酶降解；

所述磷酸盐缓冲液用量为2-5mL/0.1-0.5g透明质酸凝胶；

所述透明质酸酶溶液用量为1-5mL/0.1-0.5g透明质酸凝胶；

酶降解时间为2-8h。

4.根据权利要求1所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(2)中，分离剂为无水乙醇、氯代十六烷基吡啶、丙酮、正丁醇或乙醚。

5.根据权利要求1所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(2)中，分离剂用量为样品体积的4-10倍。

6.根据权利要求1所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(2)中，离心参数为：8000-12000rpm离心10-15min。

7.根据权利要求1所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

步骤(3)具体为：

1)取降解组及总糖组待检测样品分别置于冰水浴中，缓慢加入四硼酸钠硫酸，混匀；

2)将步骤1)混匀体系置于沸水浴中，加热12-18min，取出后冰水浴冷却；

3)各组加入咔唑乙醇溶液，混匀后沸水浴加热12-18min，取出后冷却至室温；

4)测定降解组及总糖组530nm处吸光度；降解组吸光度值与总糖组吸光度值的比值即为透明质酸凝胶的体外降解率。

8.根据权利要求7所述的一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的方法，其特征在于，

还包括设置对照组，所述对照组以水代替透明质酸凝胶，加入磷酸盐缓冲液，37℃水浴槽中恒温振荡，取出后加分离剂，混合，离心，取上清液，用水稀释后进行咔唑显色反应，用于吸光度测定调零。

9.一种测定透明质酸凝胶体外酶降解率的试剂盒，其特征在于，

包括透明质酸酶，分离剂和磷酸盐缓冲液。