[发明专利]一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法

权利要求书

1.一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

a. 洗净瑶山苣苔根部的泥土，用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浸泡20-40分钟，栽植于灭菌的混合基质中，然后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透混合基质；

b. 培养7天后用72%农用链霉素可溶性粉剂3000-4000倍稀释液浇灌基质一次并喷施叶片，再过7天后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透基质并喷施叶片；然后再重复步骤b的前述操作2次，培养至长出细嫩叶片；

c. 切取长度1.5-2.5厘米的细嫩叶片，在体积分数75%乙醇水溶液中浸泡10-30秒后，用1.0%有效氯的次氯酸溶液浸泡5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，再用0.1%升汞溶液消毒5-10分钟，无菌水冲洗4-5次，切取带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基，培养获得不定芽；

所述的不定芽诱导培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.1-0.3 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

d. 取不定芽接种在初代增殖培养基上，培养形成丛生芽；将丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上进行丛生芽的继代增殖；

所述的初代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.5-1.0 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

所述的丛生芽继代增殖培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mgKT、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为MS培养基，pH 5.8-6.0；

e. 切下继代增殖的2-3厘米高的丛生芽切成单芽接种到生根培养基培养生根苗；

所述的生根培养基，每升由以下成分组成：0.5-1.0 mg IBA、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂，余量为1/2MS培养基，pH 5.8-6.0；f. 待生根苗长至4-5厘米高时，炼苗，移栽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a的混合基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤b-e的培养条件为温度24℃-28℃，光照强度1500-2000lx，光照12-16小时/天。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤f的移栽，基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的栽培基质。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤f的移栽，培养条件为温度20℃-25℃，相对湿度75%-85%。