[发明专利]一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法有效
申请号: | 202110113257.8 | 申请日: | 2021-01-27 |
公开(公告)号: | CN112806265B | 公开(公告)日: | 2022-08-16 |
发明(设计)人: | 曾宋君;王玉兵;吴坤林;房林;李琳;马国华 | 申请(专利权)人: | 中国科学院华南植物园;三峡大学 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人: | 朱双;刘明星 |
地址: | 510650 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 叶片 外植体 瑶山苣苔 组织培养 方法 | ||
1.一种以叶片为外植体的瑶山苣苔组织培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
a. 洗净瑶山苣苔根部的泥土,用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浸泡20-40分钟,栽植于灭菌的混合基质中,然后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透混合基质;
b. 培养7天后用72%农用链霉素可溶性粉剂3000-4000倍稀释液浇灌基质一次并喷施叶片,再过7天后用25%多菌灵可湿性粉剂500-800倍稀释液浇透基质并喷施叶片;然后再重复步骤b的前述操作2次,培养至长出细嫩叶片;
c. 切取长度1.5-2.5厘米的细嫩叶片,在体积分数75%乙醇水溶液中浸泡10-30秒后,用1.0%有效氯的次氯酸溶液浸泡5-10分钟,无菌水冲洗4-5次,再用0.1%升汞溶液消毒5-10分钟,无菌水冲洗4-5次,切取带叶柄的叶片接种到不定芽诱导培养基,培养获得不定芽;
所述的不定芽诱导培养基,每升由以下成分组成:0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.1-0.3 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂,余量为MS培养基,pH 5.8-6.0;
d. 取不定芽接种在初代增殖培养基上,培养形成丛生芽;将丛生芽接种到丛生芽继代增殖培养基上进行丛生芽的继代增殖;
所述的初代增殖培养基,每升由以下成分组成:0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mg KT、0.5-1.0 mg TDZ、20-30 g蔗糖、6 g琼脂,余量为MS培养基,pH 5.8-6.0;
所述的丛生芽继代增殖培养基,每升由以下成分组成:0.5-1.0 mg 6-BA、0.5-1.0 mgKT、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂,余量为MS培养基,pH 5.8-6.0;
e. 切下继代增殖的2-3厘米高的丛生芽切成单芽接种到生根培养基培养生根苗;
所述的生根培养基,每升由以下成分组成:0.5-1.0 mg IBA、0.5-1.0 mg NAA、20-30 g蔗糖、6 g琼脂,余量为1/2MS培养基,pH 5.8-6.0;f. 待生根苗长至4-5厘米高时,炼苗,移栽。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤a的混合基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤b-e的培养条件为温度24℃-28℃,光照强度1500-2000lx,光照12-16小时/天。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤f的移栽,基质为将泥炭土、蛭石、珍珠岩以体积比1-3 : 1-3 : 1混合得到的栽培基质。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的步骤f的移栽,培养条件为温度20℃-25℃,相对湿度75%-85%。
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