[发明专利]54个Y染色体基因座的荧光复合扩增体系、试剂盒及应用

权利要求书

1.54个Y染色体基因座的荧光复合扩增体系，其特征在于，该复合扩增体系包括49对引物，可同时扩增54个位点，包括53个Y染色体STR基因座和1个Y-Indel；其中53个Y染色体STR基因座分别为：DYS393、DYS570、DYS19、DYS392、DYS549、Y-GATA-H4、DYS444、DYS593、DYS617、DYS388、DYS520、DYS460、DYS458、DYS481、DYS635、DYS438、DYS447、DYS443、DYS522、DYS622、DYS459a/b、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS448、DYS533、DYS449、DYS531、DYS510、DYS713、DYS391、DYS439、DYS437、DYS385a/b、DYS643、DYS518、DYS508、DYS596、Y-GATA-A10、DYS576、DYF404S1、DYF387S1、DYS627、DYS527a/b、DYS557、DYS645、DYS456、DYS552；

53个Y染色体STR基因座和1个Y-Indel的特异性引物如下所述：

2.根据权利要求1所述的荧光复合扩增体系，其特征在于：所述特异性引物的浓度分别为：

3.根据权利要求1所述的扩增体系，其特征在于：每对引物对的其中一条引物的5’端标记有不同的荧光素，形成五种不同颜色的荧光标记，相同的荧光标记视为一组，五组组合分别为：

Y-Indel、DYS393、DYS570、DYS19、DYS392、DYS549、Y-GATA-H4、DYS444、DYS593、DYS617、DYS388、DYS520为第一组；

DYS460、DYS458、DYS481、DYS635、DYS438、DYS447、DYS443、DYS522、DYS622为第二组；

DYS459a/b、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS448、DYS533、DYS449、DYS531、DYS510、DYS713为第三组；

DYS391、DYS439、DYS437、DYS385a/b、DYS643、DYS518、DYS508、DYS596、Y-GATA-A10为第四组；

DYS576、DYF404S1、DYF387S1、DYS627、DYS527a/b、DYS557、DYS645、DYS456、DYS552为第五组。

4.根据权利要3所述的荧光复合扩增体系，其特征在于：所述第一组采用FAM标记，第二组采用HEX标记，第三组采用L552标记，第四组采用LR600标记，第五组采用TET-592标记。

5.根据权利要求3或4所述的荧光复合扩增体系，其特征在于：还包括一组分子量内标，所述的分子量内标产物荧光采用的是AF633标记，片段大小分别为70、80、100、120、140、160、180、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、575、600、625、650。

6.根据权利要求1所述的荧光复合扩增体系，其特征在于：包含一款PCR预混液，2.5mM硫酸铵，50mM氯化钾，0.3mg/ml BSA，6.00％DMSO，100mM-120mM甜菜碱，35mM pH 8.0的Tris-HCl，1.5mM-2mM镁离子，0.2mM dNTP以及1U TaqDNA聚合酶；

所述扩增体系扩增时的反应条件为：

第1步：95℃变性10分钟，第2步：94℃变性20秒，第3步59℃退火90秒，重复2至3步28次，第4步：60℃延伸30-60分钟。

7.根据权利要求1所述的荧光复合扩增体系，其特征在于：所述的扩增体系还包括等位基因分型标准物。

8.一种试剂盒，其特征在于：包括如权利要求1-8任一项所述的荧光复合扩增体系。