[发明专利]54个Y染色体基因座的荧光复合扩增体系、试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，公开了一种54个Y染色体基因座的荧光复合扩增体系、试剂盒及应用，所述的荧光复合扩增体系包括多对特异引物，能同时扩增53个Y染色体STR基因座和1个Y‑Indel。本发明采用六色荧光标记，对53个Y染色体STR和1个Y‑Indel进行一管扩增检测，满足公安部Y‑STR DNA数据库建设的要求，包含推荐的20个核心和15个优选基因座及一些备选基因座，具有较高的累积个体识别力和累积非父排除率；同时具有信息量大、兼容性好的特点，对FTA卡、唾液卡和提取DNA样本均可以直接扩增，操作简便。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，用于检测人体基因组中短串联重复序列基因座的多态性，包含54个检测位点，通过聚合酶链式反应进行复合扩增，可以对人类Y染色体STR进行快速准确判型，进而为法医个体识别和亲子鉴定提供判断依据。

背景技术

法医DNA检验技术是当前法庭科学领域中广泛应用的技术手段之一，在实际工作中发挥了重要作用。在通常进行的基因组DNA检验中，检验对象分为常染色体和性染色体，其中性染色体包含X和Y染色体。针对Y染色体进行DNA检验，可以开展家系排查和辅助父系亲缘鉴定，进而协助限定嫌疑人所在家系群体，为案件侦查提供重要线索。

Y染色体STR基因座是指存在于Y染色体上由2-6个核苷酸组成的短串联重复序列，是目前法医Y染色体检验的主流遗传标记。Y染色体除拟常染色区(pseudoautosomalregion)外，在遗传过程中不与其他染色体发生重组，且序列结构特征能稳定地由父亲传给儿子，并为男性所特有，呈父系遗传，因此Y-STR起初主要应用于父子单亲鉴定或其他父系血缘关系的鉴别和个体识别上。随着STR分型技术的不断发展，Y染色体在男女混合斑检验、父子关系鉴定、不同来源个体分析、灾难事故的个体识别等方面的作用日益凸显，其应用范围在不断扩展。特别是在一些凶杀案件及强奸案件的家系排查中，Y-STR以其快速缩小排查范围、准确锁定案犯家系等巨大优势而获得越来越多的技术人员关注。

目前市场的Y染色体STR试剂盒包含的位点数较少，一次扩增得到的基因座信息可能无法满足实际应用的要求，需要一款尽可能多的包含Y染色体STR位点的试剂盒，提高累积个体识别力和非父排除率，应用于复杂案件中。

发明内容

为了克服上述不足，本发明对男性Y染色体STR基因座的遗传多态性进行了深入的研究，目的在于提供一种具有增强鉴别能力的Y染色体STR基因座荧光标记复合扩增体系、试剂盒及其应用，本发明所提供的试剂盒可以应用在法医鉴定及亲子鉴定等领域中。

本发明采用6色荧光，包括了公安部公布Y建库指导要求的20个核心基因座和15个优选基因座，还包含了一些备选基因座，将其应用于建库工作，得到的数据可以与公安部DNA数据库进行比对，大大提高了现有DNA数据库的利用率，同时具有更高的累积个体识别力和非父排除率。

为实现上述发明目的，本发明所采取的技术方案：短串联重复序列的复合扩增体系，包括49对引物，可同时扩增54个位点，即53个Y染色体STR基因座和1个Y-Indel；其中53个Y染色体STR基因座分别为：DYS393、DYS570、DYS19、DYS392、DYS549、Y-GATA-H4、DYS444、DYS593、DYS617、DYS388、DYS520、DYS460、DYS458、DYS481、DYS635、DYS438、DYS447、DYS443、DYS522、DYS622、DYS459a/b、DYS389I、DYS390、DYS389II、DYS448、DYS533、DYS449、DYS531、DYS510、DYS713、DYS391、DYS439、DYS437、DYS385a/b、DYS643、DYS518、DYS508、DYS596、Y-GATA-A10、DYS576、DYF404S1、DYF387S1、DYS627、DYS527a/b、DYS557、DYS645、DYS456、DYS552；所述的49对引物，核苷酸序列及对应浓度如表1所示。

表1：49对检测引物的核苷酸序列和浓度