[发明专利]一种检测血清中高密度脂蛋白的方法

权利要求书

1.一种检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤1，样品制备：准备血清，通过加入磷钨酸溶液静置后进行离心，吸出上清液放入新的离心管中；

步骤2，染色：在步骤1放置上清液的离心管中依次加入染色液和蔗糖溶液，混合均匀，得到检测样品；

步骤3，制备电泳介质：所述电泳介质采用管状凝胶体系，上层采用浓缩胶，下层采用均匀浓度的分离胶；

步骤4，电泳：将电泳介质放入盘状电泳仪，加入电泳缓冲液，之后缓慢加入步骤2得到的检测样品，先以2mA的电流进行电泳0.5-1h，待检测样品已跑出浓缩胶后，将电流调至8mA进行电泳0.5-1h，最下方指示带距玻璃管底端1cm处，电泳结束。

2.如权利要求1所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3中使用的浓缩胶包括体积比为1:2:1:4的溶液A、溶液B、溶液C和溶液D；

溶液A的制备方法包括取浓度为1mol/L的HCL 48ml、Tris 5.98g、TEMED 0.46mL,加水至100mL,调节pH至6.7；

溶液B的制备方法包括取丙烯酰胺10.0g，N,N′-亚甲基双丙烯酰胺2.5g，加水至100mL；

溶液C的制备方法包括取核黄素4mg，加水至100mL；

溶液D的制备方法包括取蔗糖40g，加水至100mL。

3.如权利要求1所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步骤3中使用的分离胶按体积份包括如下组分：

4.如权利要求3所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述分离胶储液的制备方法包括称取丙烯酰胺32.55g,以及N,N′-亚甲基双丙烯酰胺2.45g,加水至终体积为100mL，试剂完全溶解后用0.45um的膜过滤。

5.如权利要求3所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述分离胶缓冲液的制备方法包括称取Tris 18.17g，加水至体积约90mL，用浓盐酸调pH至8.8，最后加水至终体积为100mL。

6.如权利要求1或2所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述步骤2中使用的染色液为0.1-1％(w/v)苏丹黑B染色液。

7.如权利要求6所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述苏丹黑B染色液的制备方法为称取0.25g苏丹黑B，加入25mL乙二醇，在50-60℃加热5min，加热时不断搅拌，然后升温至100-110℃，加热5min，趁热使用0.22um膜过滤，待冷却后，再用0.22um膜过滤一次。

8.如权利要求1或2所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述电泳缓冲液的制备方法为取Tris 54.51g，硼酸24.73g，EDTA 5.58g加水至980mL，调节pH至8.3，加水至终体积1000mL。

9.如权利要求1或2所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述浓缩胶的胶层高度为55-65mm。

10.如权利要求1或2所述的检测血清中高密度脂蛋白的方法，其特征在于：所述分离胶的胶层高度为7-13mm。