[发明专利]检测生物制品中蛋白A等杂质的酶联免疫试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种检测生物制品中蛋白A等杂质的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、蛋白A标准品溶液、庆大霉素标准品溶液、蛋白A抗体、庆大霉素抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原为庆大霉素偶联抗原，所述酶结合物为酶标记的蛋白A抗体、酶标记的庆大霉素抗体，所述蛋白A抗体和庆大霉素抗体均是由免疫原免疫动物得到的。本发明提供的酶联免疫试剂盒可用于检测生物制品中蛋白A等杂质含量，其操作简便、费用低廉、灵敏度高、能够现场监控且适合大量样本的筛查。

技术领域

本发明涉及检测生物制品中蛋白A等杂质的酶联免疫试剂盒及其应用，具体涉及一种蛋白A免疫方法和庆大霉素人工抗原分子结构以及用于检测蛋白A的酶联免疫试剂盒，用于测定生物制品中该类杂质的残留量。

背景技术

WHO、ICH的相关法规及中国药典2010年版三部均对杂质的去除及残留限度有描述和规定。蛋白A(Protein A，ProA)是最早发现的与免疫球蛋白结合的分子之一，其作为亲和色谱的重要介质，广泛应用于Fc融合蛋白和单克隆抗体的纯化工艺过程中，ProA亲和色谱法用于纯化，优点是高性能和高纯度，缺点是能浸出ProA，属于下游工艺源杂质。浸出的ProA一方面作为金黄色葡萄球菌的膜蛋白具有免疫原性，有促有丝分裂的作用，所以控制其残留水平是保证药物安全性的一项重要指标，另外，残留ProA检测在工艺过程中也是监测色谱柱完整性的工具。残留ProA检测中，因ProA具有能够结合IgG分子的特点，从而阻碍其与相应抗体的结合，常常造成检测结果的不准确，所以该项目不但是重组Fc融合蛋白和单克隆抗体质量控制的重要指标，也一直是质量控制的难点。另外，庆大霉素等抗生素也可能存在于生物制品中，是需要检测的杂质。

通过免疫化学检测法对药物进行检测，具有快速、特异、灵敏、准确、可以批量监测、样品处理简单、能实现自动化操作等优点。本申请研究出蛋白A和庆大霉素的抗体制备方法，以便应用于快速检测方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗体制备技术，具体涉及一种用于检测蛋白A和庆大霉素的抗体制备方法，制备出的抗体可应用于快速检测方法，比如酶联免疫试剂盒。

本发明的酶联免疫试剂盒，它包括：包被有包被原的酶标板、标准品溶液、抗体、酶结合物浓缩液、酶结合物稀释液、底物显色液、终止液、洗涤液，所述包被原分别为庆大霉素偶联抗原、蛋白A，所述酶结合物分别为酶标记的庆大霉素抗体、蛋白A抗体。

所述庆大霉素偶联抗原是由庆大霉素半抗原与载体蛋白偶联得到，所述庆大霉素半抗原是由庆大霉素与4，4′-二氟-3，3′-二硝基二苯砜等物质经过一系列化学反应得到，所述载体蛋白为鼠血清蛋白、甲状腺蛋白、猪尿白蛋白、兔血清蛋白、人血清蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或纤维蛋白原。

所述庆大霉素抗体是以庆大霉素偶联抗原作为免疫原制备获得，所述庆大霉素特异性抗体可为庆大霉素单克隆抗体或庆大霉素多克隆抗体，其中优选庆大霉素单克隆抗体。

所述蛋白A抗体是以蛋白A作为免疫原制备获得，所述蛋白A抗体可为蛋白A单克隆抗体或蛋白A多克隆抗体，其中优选蛋白A单克隆抗体。

所述酶结合物的标记酶为辣根过氧化物酶或细菌提取碱性磷酸酯酶，其中优选辣根过氧化物酶；酶结合物是由酶和抗体偶联得到的。

为了更方便现场监控和大量样本筛查，所述试剂盒还包括标准品溶液、底物显色液、终止液、洗涤液。

所述庆大霉素标准品溶液6瓶，浓度分别为0μg/L，0.1μg/L，0.3μg/L，0.9μg/L，2.7μg/L，8.1μg/L。

所述蛋白A标准品溶液6瓶，浓度分别为0mg/L，0.2mg/L，0.6mg/L，1.8mg/L，5.4mg/L，16.2mg/L。