[发明专利]一种用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质，其特征在于：包括按体积分数计的如下组分：

无免疫源性人源血清 90±0.5％；

二甲基亚砜 10±0.5％。

2.权利要求1所述的用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质的制备方法，其特征在于：将体积分数90±0.5％的无免疫源性人源血清与体积分数10±0.5％的二甲基亚砜混合均匀，即获得所述的长期冻存介质。

3.权利要求1所述的用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质在改善冻存脂肪源性干细胞质量中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述的应用是将脂肪源性干细胞按浓度为10⁵～10⁶个/ml悬浮于所述的长期冻存介质中进行长期冷冻保存。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述的应用的具体操作如下：

(1)冻存细胞：

将脂肪源性干细胞按浓度为10⁵～10⁶个/ml悬浮于所述的长期冻存介质后移入冻存管，先将冻存管放入4℃预冷的冻存盒，先置于-80℃中保存24h，再转至-196℃液氮中长期冷冻保存；

(2)复苏细胞：

从液氮中取出细胞，并立即放入预热至37℃的水浴中，待细胞完全融化后，立即将细胞加入到完全培养基中，使其稀释到10～15倍，离心，弃上清，再次加入低糖完全培养基使其稀释到10～15倍，离心，弃上清，加入低糖完全培养基重悬，即可。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(1)中，所述的冷冻保存的时间为0～9个月。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(2)中，所述的完全培养基的配方组成按每500ml中含有如下组分计：440ml基础培养基DMEM，50ml脂肪间充质干细胞专用胎牛血清，5ml双抗，5ml谷氨酰胺；所述的低糖完全培养基的配方组成按每500ml中含有如下组分计：440ml基础培养基DMEM-L，50ml脂肪间充质干细胞专用胎牛血清，5ml双抗，5ml谷氨酰胺。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：

步骤(2)中，所述的离心的条件均为500～2000rpm，4～6分钟。

9.权利要求1所述的用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质在改善冻存脂肪源性干细胞冻存后存活率、增殖能力和/或多向分化能力中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

所述的多向分化包括成脂分化和/或成骨分化。