[发明专利]一种用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质及其制备方法与应用，属于生物医药技术领域。本发明的长期冻存介质包括按体积分数计的如下组分：无免疫源性人源血清90±0.5％；二甲基亚砜10±0.5％。本发明的冻存介质的应用方法是将脂肪源性干细胞按浓度为10⁵～10⁶个/ml悬浮于所述的长期冻存介质中进行长期冷冻保存。通过采用本发明的冻存介质可以提高冻存脂肪源性干细胞冻存后存活率，改善增殖能力或多向分化能力，从而改善冻存脂肪源性干细胞的质量，保留最佳生物活性，方便复苏使用，以满足临床需求，具有极大的经济和社会效益。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种用于脂肪源性干细胞的长期冻存介质及其制备方法与应用。

背景技术

脂肪源性干细胞(Adipose-derived stem cells，ADSCs)是一类由脂肪组织提取的间充质干细胞，具有自我更新、多向分化潜能，是细胞治疗及组织工程的优选种子细胞，目前是再生医学的研究热点^[1-4]。关于细胞的长期保存是临床应用、相关干细胞产品、细胞银行开展的基础，为满足临床安全使用，研究使用何种冻存方式及冻存介质才能保持细胞产品处于最佳活性，并在保留最佳生物活性的同时还能安全、有效的治疗，是现阶段最值得关注的问题。当前的低温储存技术已经应用于部分临床治疗等，如冻存血液、脱细胞异体真皮、冻存精子等，但在脂肪源性干细胞上并没有很确切的冻存后临床使用报道^[5]。在转化医学领域，脂肪干细胞作为一个新型临床治疗，广泛应用于免疫疾病、骨科疾病、心血管^[6-7]、神经再生^[8-9]、难治性溃疡，特别是在整形外科领域，ADSCs对于软组织缺陷及容量流失具有填充的作用。随着人口老年化，求美者对于衰老更加恐慌，同时许多年纪较大的求美者存在过瘦、高血压、糖尿病、癌症、自身免疫性疾病，患者期望能够一次抽脂分离细胞并达到多次使用的目的，ADSCs的细胞库建立是刻不容缓的，如何更安全跟便利的保存细胞是至关重要的。

细胞的长期保存是临床应用、相关干细胞产品、细胞银行开展的基础，为满足临床安全使用，研究使用何种冻存方式及冻存介质才能保持细胞产品处于最佳活性，并在保留最佳生物活性的同时还能安全、有效的治疗，才是现阶段最值得关注的问题。

低温冻存细胞始于18世纪末，科学家偶然发现埋藏在冰雪中的精液，复温后精子仍有缓慢游动能力，但这一现象未予重视。1886年Mouteyazza等人将精液冻存于-15℃下成功复苏精子，并首次提出“精子库”。1949年英国科学家Polge发现了甘油具有低温保护细胞的作用。1952年Sherm用含10％甘油冻存液将精子放于-78℃的干冰，复苏后67％生存率。因此低温保存可以降低细胞的新陈代谢，长期使细胞处于G0，但复苏后仍可见细胞损伤的现象。