[发明专利]一种简便、高效的细菌转化方法

权利要求书

1.一种简便、高效的细菌转化方法，包括以下步骤

（1）从-80℃超低温冰箱取出一管感受态细胞，取25μl置于1.5ml EP管中；

（2）将上述管立即放在预冷的冻存盒中静置5-10min；

（3） 取1μl连接产物，迅速加入上述管中，轻轻混匀后插在冻存盒中静置20min；

（4）将上述管在41.5℃热激90s后快速放回冻存盒上静置3min；

（5）向上述管中加300μl SOC培养液，37℃，250rpm振荡培养1h，使细菌复苏；

（6）从上述管中取150μl菌液加到含氨苄的2YT固体培养基的抗性平板上均匀涂布；

（7）倒置平皿，放在培养箱内，37℃培养过夜；

（8）观察平板上长出的菌落，以菌落能互相分开为宜；

（9）计数菌落，计算转化效率。

2.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤1) 取25μl感受态细胞进行转化实验，感受态细胞用量少，大大节省了成本。

3.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤2) 将上述管放在冻存盒中静置5-10min，实验全程在室温下进行，无须冰上操作，大大简化了工作流程。

4.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤3) 将1μl连接产物加入上述管中，混匀后插在冻存盒中静置20min。

5.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤4) 将上述管在41.5℃热激90s后快速放回冻存盒上静置3min。

6.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤5) 向上述管中加300μl SOC培养液，在37℃、250rpm条件下振荡培养1h。

7.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤6) 取150μl菌液均匀涂布到含有氨苄的2YT固体培养基上。

8.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤7) 倒置平皿于培养箱内，37℃培养过夜。

9.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤8) 菌落之间能互相分开为宜。

10.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述步骤9) 计数菌落，计算转化效率。