[发明专利]一种检测猪盖他病毒试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测猪盖他病毒的试剂盒，包括两对巢式PCR引物，其特征在于：所述第一对引物为5’-ATGGCGGACGTGTGACATCAC-3和5’-GTAACCTTCGCATGACACCACC-3，第二对引物为5’-GCTACTCCACATAGTGAGAG-3和5’-AACATGAATGGAGTGGTATC-3。

2.根据权利要求1所述的检测猪盖他病毒的试剂盒，其特征在于该试剂盒还包括ProbeqPCR MIX。

3.根据权利要求1所述的检测猪盖他病毒的试剂盒，其特征在于该试剂盒检测的是猪盖他病毒的NSP1基因。

4.一种使用权利要求1所述检测猪盖他病毒的试剂盒的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

1)提取样品GETV-NSP1基因的DNA或反转录得到cDNA，构建样品GETV-NSP1-pBM16克隆质粒；

2)以GETV-NSP1-pBM16克隆质粒为模板，使用第一对引物进行第一轮PCR扩增；

3)第一轮PCR扩增结束后，取PCR产物为模板，使用第二对引物进行第二轮PCR扩增，后进行凝胶电泳；

4)如电泳中出现326bp的条带，证明为阳性。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤2)的PCR反应条件如下：预变性95℃5min；95℃50s、50℃30s、72℃1min，30个循环，最后72℃延伸10min。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述3)中PCR反应条件如下：预变性95℃5min；95℃50s、52℃30s、72℃1min，30个循环，最后72℃延伸10min。

7.根据权利要求4所述的使用方法，其特征在于该方法的最低核酸检出量为8copies/μL。