[发明专利]一种解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白及其检测方法与应用

权利要求书

1.一种解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如序列1所示。

2.一种检测权利要求1所述的解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白的方法，包括以下步骤：

1)取待测抗凝全血制备待测血清；

2)试验设置测定管，测定空白管，非酶管，非酶空白管；先进行酶促反应，在非酶管、测定管加入等体积等浓度的UUR10_0288蛋白，接着在测定管与测定空白管中加入步骤1)中的待测血清，非酶管中加入等体积双蒸水，测定空白管中加入等体积磷酸盐缓冲液，再接着将非酶管、测定管和测定空白管在设定温度下进行预温，然后分别向测定管，测定空白管，非酶管加入双氧水试剂，在一定温度下水浴反应，反应完毕后，分别向测定管，测定空白管，非酶管中加入偏磷酸沉淀液，然后将三支试管进行离心，取上层清液作为显色反应液；

3)试验之后进行显色反应，分别取测定管，测定空白管，非酶管中在步骤2)中得到的上清液，取新的试管分别标记，非酶空白管中加入双蒸水与偏磷酸沉淀液；然后分别向4根管中，加入等体积磷酸氢钠溶液和DTNB显色液，混匀后，静置，测定管测试时，用测定空白管调零；非酶管测试时，采用非酶空白管进行调零，然后在422nm下测量各管吸光度值；

4)根据步骤3)中的测定管和非酶管中吸光度值，计算酶管中UUR10_0288蛋白的浓度。

3.根据权利要求2所述的解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白的方法，其特征在于，所述步骤1)中，血清的处理方式为离心处理；血清制备方法为：取抗凝全血2mL，3000r离心10min，得到待测血样。

4.根据权利要求2所述的解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白的方法，其特征在于，所述步骤2)中，UUR10_0288蛋白浓度为1mmol/L，测定管和测定空白管加入的待测血清的体积相同；设定温度为37℃，预温时间为5min；双氧水试剂为浓度为1.25～1.5mmol/L的H₂O₂溶液；一定温度为37℃，水浴反应时间为5min；偏磷酸沉淀液由内含1.67％HPO3,0.05％EDTA,28％NaCl,室温保存,制得；测定管中GSH、待测血清、双氧水试剂和偏磷酸沉淀液的体积比为0.2:(0.1～0.2):0.1:2，测定空白管中待测血清，磷酸盐缓冲液，双氧水试剂和偏磷酸沉淀液的体积比为0.2:(0.1～0.2):0.1:2；非酶管中GSH，双蒸水，双氧水试剂和偏磷酸沉淀液的体积比0.2:(0.1～0.2):0.1:2；将上述三支试管离心3000转/分，离心时间为10min，以获取上清液。

5.根据权利要求2所述的解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白的方法，其特征在于，所述步骤3)中，设置新的测定管、测定空白管、非酶管加入步骤2)离心得到的上清液，空白管中加入双蒸水与偏磷酸沉淀液，两者体积比为0.2:0.8，测定管、测定空白管、非酶管和非酶空白管中分别加入偏磷酸沉淀液和DTNB显色液，偏磷酸沉淀液和DTNB显色液的体积比为1.25:0.25；磷酸氢钠溶液的浓度为0.32mol/L；DTNB显色液是内含0.04％DTNB和1.0％枸橼酸三钠制备而成，保存是需要再4℃避光保存，超过一个月，需要重新配置。

6.根据权利要求1～5中任意一项所述的解脲脲原体蛋白UUR10_0288蛋白的方法，其特征在于，所述步骤4)，UUR10_0288蛋白蛋白浓度的计算公式为：