[发明专利]一种木麻黄的种质资源离体保存方法

权利要求书

1.一种木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)培养基的配制：包括基本培养基和离体各阶段的培养基：

a)MS培养基：每升MS培养基中含有无机添加物KNO₃ 1650-2150mg、NH4NO3 1420-1740mg、MgSO4·7H2O 295-382mg、KH2PO4 156-183mg、CaCl2·2H2O 367-428mg、Na2-EDTA·2H2O 32.6-42.50mg、FeSO4·7H2O 28.67-40.22mg、FeSO4·4H2O 19.80-32.43mg、MnSO4·H2O 13.64-19.75mg、MnSO4·4H2O 18.74-27.75mg、ZnSO4·7H2O 6.88-10.32mg、H2BO3 5.96-7.24mg、KI 0.66-0.96mg、Na2MoO4·2H2O 0.20-0.30mg、CuSO4·5H2O 0.020-0.033mg、CoCl2·6H2O 0.020-0.035mg，含有有机添加物肌醇80-120mg、烟酸0.4-0.6mg、甘氨酸1.8-2.5mg、盐酸吡哆醇B6 0.4-0.6mg和盐酸硫胺素B1 0.08-0.12mg；

b)启动培养基：包括MS+6-BA 1-3mg/L+NAA 0.01-0.5mg/L+蔗糖20-50g/L+植物凝胶3g/L,PH值为5.6-6.0；

c)扩繁培养基：包括MS+6-BA 0.2-0.8mg/L+NAA 0.1-0.5mg/L+蔗糖10-40g/L+植物凝胶2-5g/L,PH值为5.6-6.0；

d)保存培养基：包括1/4MS+多效唑0.05-0.5mg/L+6-BA 0.1-0.5mg/L+蔗糖10-50g/L+植物凝胶1.5-5.5g/L,PH值为5.6-6.0；

(2)清洗和灭菌：将木麻黄枝条彻底清洗干净，然后进行灭菌；

(3)离体培养：从灭菌后的木麻黄枝条切取1-3cm茎段，接入启动培养基中进行启动培养，5-30天后转到扩繁培养基中进行扩繁培养10-30天，再转入保存培养基中；

(4)离体保存：将转入试管苗的保存培养基于温度1-15℃和光照200-1000Lux条件下进行保存，每天光照2-12h。

2.根据权利要求1所述的木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，所述的木麻黄枝条取自两年生以上木麻黄植株的基部萌蘖枝条。

3.根据权利要求1所述的木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，所述的灭菌过程包括分别用质量浓度为50-80％的乙醇、0.2-0.5％的苯扎溴铵、1-4％的次氯酸钠依次浸泡灭菌10-60s、5-30min、5-20min，无菌水冲洗2-5次，再用0.1-0.5％的氯化汞灭菌3-10min，无菌水冲洗3-5次。

4.根据权利要求3所述的木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，所述的灭菌过程包括分别用质量浓度为70％的乙醇、0.3％的苯扎溴铵、3％的次氯酸钠依次浸泡灭菌10-60s、5-30min、5-20min，无菌水冲洗2-5次，再用0.3％的氯化汞灭菌3-10min，无菌水冲洗3-5次。

5.根据权利要求1所述的木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，所述的茎段为选自顶芽或带有腋芽的茎段。

6.根据权利要求1所述的木麻黄的种质资源离体保存方法，其特征在于，所述1/4MS培养基是大量元素为MS配方量的1/4。