[发明专利]一种木麻黄的种质资源离体保存方法

说明书

本发明公开了一种木麻黄的种质资源离体保存方法，以木麻黄植株幼嫩木质化枝条作为外植体，将木麻黄枝条彻底清洗干净，然后进行灭菌，从灭菌后的木麻黄枝条切取1‑3cm茎段，接入启动培养基中进行启动培养，5‑30天后转到扩繁培养基中进行扩繁培养10‑30天，然后转入保存培养基中于温度1‑15℃和光照200‑1000Lux条件下进行保存；本发明提出的木麻黄的种质资源离体保存方法建立了木麻黄种质资源保存的无菌体系，采取组织培养，有效脱除潜伏在木麻黄中病毒性病害，实现真正无病害种质资源保存，具有遗传性状稳定，培养过程简单，保证了种质基因的完全保留。

技术领域

本发明涉及组织培养与种质资源保存技术领域，具体涉及一种木麻黄的种质资源离体保存方法。

背景技术

木麻黄属于木麻黄科，为常绿乔木，具有耐干旱、耐瘠薄、耐盐碱、固氮改土、防风、固沙、速生等特性，被广泛用于防风固沙、盐碱地改良和干旱区造林，是我国南方贫瘠的沿海沙地、严重退化的丘陵地区的造林先锋树种，在沿海防护林中占有重要地位，具有巨大的生态经济价值。

目前木麻黄种质资源保存方法通常是以种子园或种源试验林的形式进行种质保存，繁殖技术有种子繁殖、扦插繁殖、嫁接繁殖等。以种子繁殖为种质进行资源保存的技术难以完全保留优良木麻黄树种基因；而以插条繁殖的种质进行资源保存的方法工作量大，劳动强度高成本不易控制，且该技术在有些木麻黄树种不太容易实现，比如山地木麻黄、滨海木麻黄和森林木麻黄等。受木麻黄树种本身形态特征的客观影响，嫁接繁殖在不同木麻黄树种之间成活率差异较大，枝条较粗的粗枝木麻黄嫁接成活率较高，枝条较细软的短枝木麻黄、细枝木麻黄和山地木麻黄嫁接成活率较低。且受嫁接工人技术水平的影响较大，令种质资源保存稳定性和效率大打折扣。此外，上述传统方法均不能对木麻黄种质资源进行脱除病毒保存，以至于一些引起植物病害的病毒、类菌质体和类病毒等病原微生物随种质资源一同保存下来，可能会为日后种质资源的大量繁殖及应用于造林带来毁灭性的灾难。

由于林木种质资源保存是实现林业可持续发展的重要组成部分，做好、做细林木种质保存工作，使林业优良种质资源得到有效保存，直接关系到人工林产量持续提高与抗逆性品种的发展。因此，利用木麻黄的种质资源离体保存的方法，使其能脱除病毒保存，保存的资源种植后遭除植物病害的侵害，真正实现“高产、优质、稳定、高效”的目的具有重要意义。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种木麻黄的种质资源离体保存方法，不仅使目标木麻黄品系种质资源基因得以完整保留，而且保存材料能够脱除病毒，令日后保存的资源大范围运用时避免植物病害的发生。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种木麻黄的种质资源离体保存方法，包括以下步骤：

(1)培养基的配制：包括基本培养基和离体各阶段的培养基：

a)MS培养基：每升MS培养基中含有无机添加物KNO₃ 1650-2150mg、NH4NO3 1420-1740mg、MgSO4·7H2O 295-382mg、KH2PO4 156-183mg、CaCl2·2H2O 367-428mg、Na2-EDTA·2H2O 32.6-42.50mg、FeSO4·7H2O 28.67-40.22mg、FeSO4·4H2O 19.80-32.43mg、MnSO4·H2O 13.64-19.75mg、MnSO4·4H2O 18.74-27.75mg、ZnSO4·7H2O 6.88-10.32mg、H2BO3 5.96-7.24mg、KI 0.66-0.96mg、Na2MoO4·2H2O 0.20-0.30mg、CuSO4·5H2O 0.020-0.033mg、CoCl2·6H2O 0.020-0.035mg，含有有机添加物肌醇80-120mg、烟酸0.4-0.6mg、甘氨酸1.8-2.5mg、盐酸吡哆醇B6 0.4-0.6mg和盐酸硫胺素B1 0.08-0.12mg；