[发明专利]一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法

权利要求书

1.一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）采集莫干山竹林中未开出的完好、硬实野生红托竹荪蛋，清除野生红托竹荪蛋表面的杂尘，对野生红托竹荪蛋进行清洗和消毒；

（2）将野生莫干山野生红托竹荪蛋纵向剖开，取出中间第二层的菌裙组织，接种至灭菌后的分离培养基上，将培养基封口后置于黑暗条件下进行分离培养；

所述分离培养基的配方为：葡萄糖20~30 g，蛋白胨2~4 g，磷酸二氢钾1~3 g，硫酸镁0.5~2 g，柠檬酸铵0.5~2 g，维生素B1 40~60 mg，含90~110 g马铃薯、40-55 g豆粕和70~100g竹林土的混合煮出液，纯净水定容至1L后，加入琼脂粉11-15g；

所述竹林土为采集到的野生红托竹荪蛋周边2~5cm范围内的地面以下5~10 cm土层的土壤，去除土壤表面覆盖的落叶；

所述分离培养基的制备方法为：

（A）马铃薯去皮后，按比例将马铃薯、豆粕和竹林土加入至纯净水中，大火煮沸后，小火继续煮一段时间，至溶液中固体物质充分沉淀后，取上清液，得到混合煮出液；

（B）按比例将葡萄糖，蛋白胨，磷酸二氢钾，硫酸镁，柠檬酸铵，维生素B1加入到步骤（A）的混合煮出液中，再用纯净水定容至1L，纯净水定容后加入琼脂粉，充分搅拌后微波炉加热至沸腾，取出后轻轻搅拌，再重复加热2~3次，保证琼脂粉完全融化，得到分离培养基；

（C）待分离培养基冷却至60~80℃后，封口，进行高压灭菌，灭菌结束后，冷却至60~80℃，得到灭菌后的分离培养基；

（3）菌裙组织经步骤（2）分离培养一段时间后，选择菌丝生长整齐、色泽均匀的培养皿，通过无菌操作挑取菌落尖端菌丝接种到新的分离培养基上，继续培养一段时间直至培养皿发满，获得莫干山野生红托竹荪纯菌种。

2.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（1）中，所述野生红托竹荪蛋的清洗和消毒方法为：用无菌水冲洗野生红托竹荪蛋2~4遍后，用灭菌过的滤纸吸干水分；再用75%的酒精喷洒野生红托竹荪蛋的表面，然后用75%的酒精棉球反复擦拭，进行表面消毒。

3.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（2）中，所述菌裙组织为块状，大小为：（5~6）×（5~6）×（3~4）mm。

4.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（2）中，所述分离培养的条件为：22-28℃下培养2~4天。

5.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（A）的混合煮出液制备过程中，小火继续煮的时间为15~20 min。

6.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（C）中，高压灭菌的条件为：121-126℃下高压灭菌20-30min。

7.如权利要求1所述的莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，其特征在于，步骤（3）中，继续培养的条件为：黑暗条件下，22-28℃下培养2~4天。