[发明专利]一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法

说明书

本发明公开了一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，该方法包括：采集莫干山竹林中的野生红托竹荪蛋进行清洗和消毒；将红托竹荪蛋纵向剖开，取出中间第二层的菌裙组织，接种至分离培养基上，进行分离培养；挑取菌落尖端菌丝接种到新的分离培养基上，继续培养，获得莫干山野生红托竹荪纯菌种。本发明方法通过分离野生红托竹荪的白色菌群，并采用竹林土、柠檬酸铵和马铃薯用量减半的PDA综合培养基作为分离培养基组分进行配合使用，不仅能够分离纯化获得到莫干山野生红托竹荪菌种，而且能够有效缩短菌种的萌发时间，提高萌发率，促进菌种菌丝的生长，以及抑制菌丝的老化。

技术领域

本发明涉及食用菌育种和生产技术领域，尤其涉及一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法。

背景技术

红托竹荪是常见并可供食用的四种竹荪中最名贵的一种。野生红托竹荪主要生长于贵州、云南、四川I和浙江等竹林的腐殖土。自从人工分离驯化以来，红托竹荪经过四五十年的摸索，目前已经可以大规模人工栽培。红托竹荪最早是在贵州省织金县野生驯化开始人工栽培的，因此目前红托竹荪的种植主要集中在贵州省内，是贵州省的名优特产。红托竹荪在贵州漫长的栽培过程中，目前已出现了严重的菌种退化，存在品种单一，优良品种紧缺的问题。

莫干山风景名胜区位于浙江省湖州市德清县，属天目山余脉，主峰塔山海拔758米。以竹、泉、云和清、绿、凉、静的环境著称，素有“清凉世界”之美誉。莫干山独特的自然条件孕育了丰富的野生菌，在该处的竹林经常能找到野生红托竹荪。由于红托竹荪，野生种分离不易萌发，菌丝萌发后在培养基中随着培养时间的延长，容易发生色变，主要由白色变为淡红色，菌丝易失水等独特的生物学特性，从而很难获得莫干山野生红托竹荪纯菌种。同时由于红托竹荪特殊的生物学特性，常规的琼脂培养基配方都不适红托竹荪菌种分离、纯化和扩繁，给红托竹荪野生资源收集、纯化造成困难，特别是莫干山野生红托竹荪种质资源难以利用。

公布号为CN110637681A的名称为“一种红托竹荪母种的培养方法”的发明专利申请提到利用竹素土、马尾松针、杂木屑等物质煮汁配制琼脂培养基，一方面竹素土配制程序复杂，需将竹枝、竹根、竹屑、竹叶以及废旧竹片、断竹材料等进行粉碎，按照竹元素粉碎物、牛(羊)粪粉、沼渣、复合肥为100:15:10:1的比例混匀并发酵腐熟，所需物质种类多，配制时间长，另一方面，这一琼脂培养基用于红托竹荪菌种扩繁可以，用于分离野生红托竹荪萌发困难，尤其是莫干山野生红托竹荪菌种萌发困难，接种块易褐化。

公告号为CN104920065B的名称为“一种梵净山野生红托竹荪母种制作方法”的发明专利申请提到一种野生红托竹荪菌种分离方法，但莫干山野生红托竹荪利用该方法分离萌发速度和菌丝生长速度都很慢，容易变红老化，难以获得高利用价值的纯菌种。文献“红托竹荪母种分离培养初探”提到的方法中用于分离的红托竹荪为人工栽培所得，用该方法分离莫干山野生红托竹荪也不能获得成功。同时利用木屑等固体菌种进行红托竹荪菌种保藏、扩繁，污染不易发现，造成菌种纯化困难，容易退化。例如公布号为CN110100657A的名称为“一种红托竹荪试管母种的生产方法”的专利申请采用的即是木屑培养基。

因此，有必要提供一种适合莫干山野生红托竹荪的分离和纯化方法。

发明内容

本发明提供了一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，该方法适用于莫干山野生红托竹荪的分离和纯化，不仅能够分离纯化获得到莫干山野生红托竹荪菌种，而且能够有效缩短菌种的萌发时间，提高萌发率，促进菌种菌丝的生长，以及抑制菌丝的老化。

具体技术方案如下：

本发明提供了一种莫干山野生红托竹荪菌种的分离和纯化方法，包括以下步骤：

(1)采集莫干山竹林中未开出的完好、硬实野生红托竹荪蛋，清除野生红托竹荪蛋表面的杂尘，对野生红托竹荪蛋进行清洗和消毒；

(2)将野生莫干山野生红托竹荪蛋纵向剖开，取出中间第二层的菌裙组织，接种至分离培养基上，将培养基封口后置于黑暗条件下进行分离培养；