[发明专利]一种大黄粉指纹图谱的检测方法及其应用

说明书

本发明提供一种大黄粉指纹图谱的检测方法。本发明还提供了上述大黄粉指纹图谱的检测方法在大黄粉中成分的质量检测中的用途及其质量检测方法。本发明进一步提供了上述大黄粉中14种成分含量的测定方法。本发明提供的一种大黄粉指纹图谱的检测方法及其应用，建立了大黄粉的高效液相指纹图谱，能够对大黄粉中14种化学成分进行了定量分析，并有效降低大黄粉生药粉中的微生物含量，保证临床用药的安全有效，为更好地建立大黄粉整体质量控制评价体系提供科学试验依据。

技术领域

本发明属于中药成分检测的技术领域，涉及一种大黄粉指纹图谱的检测方法及其应用，具体涉及一种大黄粉指纹图谱的检测方法及其大黄粉中14种有效成分的含量测定方法。

背景技术

大黄为我国传统常用中药材，始载于《神农本草经》列为下品，并收录于历版《中国药典》中，其中2015版《中国药典》收载的正品大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎，具有泻下攻积，清热泻火，凉血解毒，逐瘀通经，利湿退黄的功效。用于实热积滞便秘，血热吐衄，目赤咽肿，痈肿疔疮，肠痈腹痛，瘀血经闭，产后瘀阻，跌打损伤，湿热痢疾，黄疸尿赤，淋证，水肿；外治烧烫伤。

公司重点产品胆宁片在制剂过程中以大黄药材粉碎后的大黄粉作为中间体进行生产加工。但中成药的药材原料粉及制作工艺较复杂，生产过程中容易受各种微生物的污染，影响制剂成品的质量。因此需要对胆宁片中间体大黄粉进行生产灭菌。

中药指纹图谱具有整体、宏观、模糊分析等特点，可通过对中药整体特征的描述，采用适当模糊处理方式，能较全面地反映出其内含化学成分的种类及数量，达到整体质量控制的目的，因此成为中药质量控制的有效手段，已广泛应用于中药质量监测和评价领域。其中色谱指纹图谱分析可以使中药所含多种化学组分的整体特征可视化，从而披露出常规检验难以发现的质量问题。指纹图谱是根据中药多组分、多靶点的整体综合作用的特点，从“全成分”的角度出发的一种现代中药质量控制方法，对非单一成分药物的质量控制更加全面。

大黄药材中化学成分复杂，因此，有必要建立大黄粉的指纹图谱与多成分含量测定，能够完成对大黄粉中成分的定性定量分析，以便对大黄粉进行有效的质量控制。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种大黄粉指纹图谱的检测方法及其应用，采用优化条件的前处理及高效液相色谱方法(UPLC-PDA)，建立了大黄粉的高效液相指纹图谱，从不同侧面突出反映不同类别化学成分对大黄粉指纹图谱系统的贡献。同时，对大黄粉中14种有效成分进行检测，较全面的反映大黄粉中各成分的现状，并控制大黄粉中的微生物水平，为整体控制和评价大黄粉质量提供参考依据。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种大黄粉指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：将大黄粉样品加入有机溶剂溶解，超声提取后冷却，取上清液过滤，取续滤液即得供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：提供对照品溶液，所述对照品溶液包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-3-羟甲基-O-葡萄糖苷、大黄酸-8-O-葡萄糖苷、大黄素-8-O-葡萄糖苷、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄酚-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、番泻苷A对照品和有机溶剂；

3)测定：采用相同色谱条件的高效液相色谱(HPLC)法分别测定供试品溶液和对照品溶液，获得供试品溶液的指纹图谱和对照品溶液的指纹图谱，将供试品溶液的指纹图谱与对照品溶液的指纹图谱进行比较，对供试品溶液指纹图谱中的指标成分进行归属定位，从而获得大黄粉指纹图谱。

优选地，步骤1)中，所述大黄粉样品为将大黄生药粉碎后获得的粉末样品。

优选地，步骤1)中，所述大黄粉样品在制备供试品溶液前要进行⁶⁰Co-γ射线辐照。