[发明专利]一种外泌体PD-L1的研究方法

说明书

本发明公开了一种外泌体PD‑L1的研究方法，包括如下步骤：1)将细胞与非天然糖共培养，细胞泌出含有非天然糖的外泌体；2)将功能性探针标记到非天然糖上,所述的功能性探针具有第一标记；3)适体识别外泌体表面的蛋白，所述的适体具有第二标记；4)第一标记同第二标记相互作用，检测该相互作用的效果，从而检测外泌体蛋白的糖基化信息。即可原位检测外泌体PD‑L1的糖基化，操作简单，无需裂解细胞等侵入性操作，保持细胞的完整性和功能。

技术领域

本发明涉及一种外泌体PD-L1的研究方法。

背景技术

外泌体程序性死亡配体1(exoPD-L1)与T淋巴细胞表面的程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)结合，抑制T淋巴细胞的增殖、细胞因子产生和细胞毒性，从而抑制免疫应答。研究exoPD-L1导致的免疫抑制机制，发现更准确的exoPD-L1导致的免疫预测靶标，对于了解其作为免疫抑制生物标志物的重要性及其作为预测免疫治疗反应的生物标志物的潜力具有重要意义。

在现有技术中：

CN201910145354.8公开了一种PD L1外泌体的体外快速检测平台及检测方法，检测平台包括样品初滤区、纳滤区、显色物垫区、显色区和吸水垫区。所述显色区上的捕获抗体和显色物垫区上的显色物标记抗体中至少有一种为外泌体PD L1抗体。检测方法为先将待检样品经过初滤膜进行初步过滤，再经过纳滤膜进行过滤，得到外泌体；外泌体与显色物标记抗体特异性地结合，与显色物标记抗体特异性结合的外泌体再与捕获抗体结合，形成双抗体夹心；所述捕获抗体和显色物标记抗体至少有一种为外泌体PD L1抗体。此平台集成全血分离，外泌体纯化以及PD L1外泌体特异检测。

CN202010083389.6公开一种基于适配体传感器的高灵敏检测血清中PD L1的方法，属于用药辅助诊断领域。目前血清外泌体PD L1中的检测是基于抗原抗体杂交的酶联免疫技术，具有检测成本高、操作难度大等缺点。该发明以PD L1适配体为例，通过酶切辅助靶循环及Q PCR实现检测信号的多重放大，建立了一种PD L1超敏检测传感器。

以上的研究方法检测体液中所有的exoPD-L1，而临床研究表明，exoPD-L1的水平与肿瘤患者的基础病理情况不一致，以exoPD-L1水平区分肿瘤患者以及健康人存在假阳性和假阴性，并且exoPD-L1水平无法预测部分患者的免疫治疗反应。因此进一步研究exoPD-L1的抗肿瘤免疫机制，发现更准确的exoPD-L1免疫预测靶标，对于了解其作为免疫抑制生物标志物的重要性及其作为预测免疫治疗反应的生物标志物的潜力具有重要意义。

发明内容

本发明的主要目的，在于提供一种外泌体PD-L1的研究方法。

本发明解决其技术问题的所采用的技术方案是：

一种外泌体PD-L1的研究方法，包括如下步骤：

1)将细胞与非天然糖共培养，细胞将非天然糖代谢至细胞表面，泌出含有非天然糖的外泌体；

2)将功能性探针标记到非天然糖上,所述的功能性探针具有第一标记；

3)适体识别外泌体表面的PD-L1蛋白，所述的适体(aptamer)为具有第二标记的核酸适体；

4)第一标记同第二标记相互作用，检测该相互作用的效果，从而检测外泌体PD-L1糖基化信息。

优选地，所述的非天然糖包括可用于N-糖基化代谢标记的非天然糖中的至少一种。

优选地，所述的一种外泌体的糖基化研究方法，非天然糖可直接投入细胞培养基中与细胞共培养，或将其包裹于功能材料中与细胞共培养。

优选地，所述的第一标记包括发光染料、生物素化探针、纳米材料中的至少一种。